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复方苦参注射液对PC-3细胞凋亡影响[摘要] 目的：研究复方苦参注射液对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响。方法：用复方苦参注射液对体外培养的人前列腺癌PC-3细胞进行药物处理，采用MTT比色分析法测定复方苦参注射液不同剂量组对PC-3细胞生长的调控作用；采用流式细胞仪分析复方苦参注射液对PC-3细胞周期分布的影响。结果：复方苦参注射液可抑制PC-3细胞的增殖，诱导其凋亡，改变细胞周期分布，使G0/G1期PC-3细胞比例增高。结论：复方苦参注射液可诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，改变细胞周期分布，从而抑制细胞增殖。 [关键词] 复方苦参注射液；PC-3细胞系；流式细胞术 [中图分类号] R962[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）10（a）-028-02 近年来，随着工业的发展，环境污染日益加重，肿瘤的发病率日益增高，手术治疗是早期肿瘤治疗的主要方法，但大多数患者就诊时即为晚期，失去了手术治疗的最佳时机，对于不能手术切除病灶的中晚期患者，尤其对于老年肿瘤患者，化疗的不良反应严重，难以耐受。现在，中药抗癌作用受到越来越广泛的关注，本研究旨在通过实验研究，探讨复方苦参注射液对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响。 1材料和方法 1.1试剂和仪器 人前列腺癌细胞PC-3(购自上海麦莎生物公司)，复方苦参注射液(购自山西振东制药有限公司)，羊抗鼠FITC-IgG抗体(美国Sigma公司)。冷冻离心机，CO2培养箱，流式细胞仪。 1.2方法 1.2.1 PC-3细胞的培养将购买的细胞培养于RPMI-1 640培养基中(其中添加10%小牛血清，100 U/mL青霉素和100 g/mL链霉素)，细胞传代使用0.125%胰蛋白酶消化，每2天换1次培养液。当细胞培养至一定规模时，用胰蛋白酶消化获得细胞，用PBS多次洗涤，分别以每孔2×104个将细胞接种到96孔板中，以每孔1.5×105个接种到24孔板，细胞接种后继续培养24 h，然后用于不同的实验。 1.2.2 PC-3细胞增殖抑制检测(MTT)细胞接种至96孔板24 h后加入复方苦参注射液使其浓度分别为300、150、75、35、18.75 μl/ml，设不加复方苦参注射液的阴性对照和不接种细胞的空白对照。37℃下置于CO2培养24、48、72 h，每个浓度每个时点接种3孔。每24小时换液，于终止前4 h，每孔加入5% MTT，继续孵育4 h后弃上清液，每孔加二甲基亚砜100 μl，于490 nm波长处在荧光酶联分析仪上测光吸收值(A值)，求平均值，计算抑制率。抑制率=(1-实验组平均A值/对照组平均A值)×100%。 1.2.3流式细胞术细胞接种24孔板培养24 h后换液，实验组加入复方苦参注射液使其终浓度分别为300、75、18.75 μl/ml，设不加药对照组（0 μl/ml）。每24小时换液，孵育48 h后收获细胞，吹冲成细胞悬液，PBS洗涤，1 200 r/min离心5 min，弃上清，加入PBS制成细胞悬液(细胞计数＞105个/ml)，加入70%冷乙醇固定。4℃下置于PI染液暗室孵育30 min，流式细胞仪检测DNA二倍体。 1.2.4统计学方法应用SPSS 10.0软件，采用方差分析及 SNK两两间检测。 2结果 2.1复方苦参注射液对PC-3细胞增殖的抑制作用 不同浓度处理组分别培养24、48、72 h，MTT法测定细胞生长情况，计算抑制率。复方苦参注射液对PC-3细胞增殖具有抑制作用，其作用具有时间和剂量依赖性，差异有显著性(P 1