常见出血实验模型建立方法.doc

常见出血实验模型建立方法摘 要:通过对近10年来国内有关出血实验模型的文献资料进行整理与分析,从脑、眼、肺、胃、胰腺和子宫等常见出血部位入手,对出血实验模型的建立方法进行概述,为止血药物的实验室研究提供更多的方法学依据。 关键词:出血部位;动物模型;建立方法 中图分类号:R965.2文献标识码:A文章编号:1673-2197(2009)06-0009-03 出血性疾病是临床常见病和多发病。选择、建立合适的出血实验模型是研究出血性疾病和止血药物的重要手段。探索和研究出血模型的建立方法对于止血药物的筛选和药效学评价等都具有重要意义。近年来,许多学者将致损因素和中西医病因结合起来,应用各自设计的动物模型对止血药物及其作用机制进行了大量的实验研究,其中涉及到脑、眼、肺、胃、胰腺和子宫等常见出血部位。现将不同部位常见出血动物模型建立方法在国内的研究进展介绍如下。 1 脑出血模型 建立稳定、可重复、贴近人类的脑出血(ICH)模型是实验及临床研究的关键。目前常用的ICH模型主要有脑内注入自体血模型、胶原酶诱导ICH 模型、自发性ICH 模型和微气囊植入ICH 模型[1]。实验动物常选用猪和大鼠,有以下几点原因:①猪在解剖、组织、生理、营养代谢等方面与人类极为接近,脑容量较啮齿类动物大20~30倍[2];②大鼠脑血管解剖及生理接近人类。相关实验资料如生理、生化、药理、形态等较多,便于比较研究,大鼠价廉,且易繁殖获得纯种动物,利于实验结果的一致性[3]。 曾锦旗等[4]用颅内直接注血法建立大鼠出血性中风中经络模型以及动脉粥样硬化性家兔出血性中风中经络模型。结果出血性中风大鼠出现明显血肿,组织病理学改变与人类出血性中风中经络相似。兔脑出血模型建立在动脉粥样硬化的基础上,更接近于临床。戴如飞等[5]通过立体定向术向大鼠脑内注入一定量的自体血建立脑出血模型,成功率高(93.3%),方法简便,与临床脑出血相似。研究者认为该模型适合研究脑实质出血的自然过程、病理形态学特点及药物疗效观察。于海洲等[6]在实验研究中发现家兔在造影后经常死亡,或出现昏迷、偏瘫、血尿等并发症,对实验结果存在一定的影响。为此改进了以往经颈总动脉或股动脉插管至主动脉弓的造影方法,参照临床应用的经肱动脉穿刺逆行椎基底动脉造影方法,采用22号套管针穿刺腋动脉法行基底动脉造影,较好地解决兔模型造影死亡率高的问题。 建立蛛网膜下腔出血模型一般采用两种方式[7]:一是将自体动脉血直接注入蛛网膜下腔;二是刺破颈内动脉颅内段某一部位,使血液自动流入蛛网膜下腔。第一种造模方式有侧脑室插管注血法和经额蛛网膜下腔插管注血法等[8,9],但多采用小脑延髓池注射自体动脉血的方法造模。高成等[10]分别采用颈内动脉穿刺法(PIC)、枕大池2次注血法(ACM)和交叉前池注血法(APC)建立大鼠SAH 模型。认为这3种方法制成的模型适用于研究SAH 不同病理生理改变的需要。PIC脑水肿重、病死率高,适用于SAH 后脑损害的机制研究;ACM脑血管痉挛的时间特征与人SAH 后血管痉挛接近,适用于血管痉挛的机制研究;APC血液恒定分布于前循环,病死率低,适用于研究SAH 后急性脑血管痉挛的发病机制。 2 眼出血模型 激光眼内造模法是眼科比较常见的建模方法,早在20世纪60年代初视网膜激光光凝开始即有所发现。20世纪70年代卫煊等[11]用白兔、猫、狗、猴等进行红宝石激光视网膜光凝实验,发现过高能量会引起视网膜出血乃至玻璃体出血。李晟等[12]用FD-Nd:YAG 532固体激光建立典型视网膜出血和视网膜前出血模型。研究者认为激光通过裂隙灯适配器发射,经激光角膜接触镜能准确聚焦于所需照射部位,定位性好,出血位置便于观察,是较理想的眼内出血模型。 钱秋海等[13,14]用胰蛋白酶建立家兔眼内出血模型,眼底镜观察糖视清对家兔眼内出血的影响。大致方法是:用戊巴比妥钠麻醉,50 u/0.2mL胰蛋白酶,球后注射,注射后每5min,用眼底镜观察1次,观察有无出血、渗血,并计算出血量。 3 肺出血模型 司徒勋等[15]通过外源性五羟色胺(5-HT)气管滴入建立新生大鼠肺出血模型,浓度以1×10-5mol/mL较为适宜。模型制作简便,重复性好,其中弥漫性肺出血占10 %～15 %。研究者认为肺出血可能为5-HT 气管滴入后导致急性缺氧,诱导ET-1分泌所致,因为ET-1参与肺动脉高压形成及增加毛细血管通透性,内源性ET-1的升高是导致肺出血的重要原因。 陈克正等[16]用低温加缺氧建立低温、缺氧两种病因引起肺出血的动物模型;李娟等[17]用高分子右旋糖酐静脉注射建立高血粘滞征引起肺出血的动物模型;吴春英等[18]用肾上腺素皮下注射法,模拟临床先天性心脏病,