发酵工艺过程控制-生物在线.doc

第七章 发酵工艺过程控制发酵产品生产过程是非常复杂的生物化学反应过程。为了使生产过程达到预期的目的，获得较高的产品得率，只有采取各种不同方法测定生物代谢过程中代谢变化的各种参数，掌握代谢过程的变化情况，结合代谢控制理论，才能有效控制发酵过程。　 不管是微生物发酵还是动植物细胞的培养过程，均是细胞按照生命固有的一系列遗传信息，在所处的营养和培养条件下，进行复杂而细微的各种动态的生化反应的集合。为了充分表达生物细胞的生产能力，对某一特定的生物来讲，就要研究细胞的生长发育和代谢等生物过程，以及各种生物、理化和工程环境因素对这些过程的影响。因此研究菌体的培养规律、外界控制因素对过程影响及如何优化条件，达到最佳效果是发酵工程的重要任务。本章主要介绍微生物发酵的工艺过程控制。第一节发酵过程中的代谢变化与控制参数　　前已述及微生物发酵有三种方式即分批发酵(batchfermentation)、补料分批发酵(fed-batchfermentation)和连续发酵(continuousfermentation)。工业上为了防止出现菌种衰退和杂菌污染等实际问题，大都采用分批发酵或补料分批发酵这两种方式。其中补料分批发酵已被广泛采用，因为它的技术介于分批发酵和连续发酵之间，兼有两者的优点，又克服了它们的缺点。各种不同发酵方式菌体代谢变化也不相同，但为了了解其基本变化，仍以分批发酵为基础来说明其代谢规律。　 微生物的分批发酵过程，因其代谢产物的种类不同而有一定的差异，但大体上是相同的。产生菌体经过一定时间不同级数的种子培养，达到一定菌体量后，移种到发酵罐进行纯种和通气搅拌发酵（发酵工业中，绝大部分是好氧发酵），到规定时间即结束。如在霉菌、放线菌的发酵过程中，随着菌体的生长和繁殖，培养液的物理性质、菌体形态和生理状态都可能会发生显著的变化，如：培养液的表观黏度可能增大，液体的流变学特性改变，进而影响罐内的氧传递、热传递和液体混合等过程。细胞在初期和后期的生理活性也不相同。因此，了解各种不同菌体在发酵过程中的生长曲线及代谢变化，有利于对发酵过程进行控制。　 从产物形成来说，代谢变化就是反映发酵中的菌体生长、发酵参数的变化(培养基和培养条件)和产物生成速率这三者之间的关系。按照菌体生长、碳源的利用、产物的生成速率的变化以及这三者之间的动力学关系来考虑，Gaden把微生物发酵过程分为三种类型(参见第五章)。微生物的代谢产物，按其与菌体生长、繁殖的关系来说，又分为初级代谢产物(primarymetabolite)和次级代谢产物(secondarymetabolite)。对微生物酶、药物来说，这两类产物都有，特别是抗生素这类次级代谢产物在微生物药物中占有最大的比重。1、初级代谢的代谢变化　　初级代谢是生物细胞在生命活动过程中所进行的代谢活动，其产物即为初级代谢产物。发酵中的菌体、基质和产物三者变化的基本过程是：菌体进入发酵罐后就开始生长、繁殖，直至一定的菌体浓度。其生长过程仍显示停滞期、对数期、稳定期和衰亡期等生长史的特征。但在发酵过程中，即使同一菌种，由于菌体的生理状态与培养条件的不同，各个时期时间长短也不尽相同。如停滞期的长短就随培养条件而有所不同，并与接种菌的生理状态有关。对数期的菌种移植到与原培养基组成完全相同的新培养基中，就不会出现停滞期，仍以对数期的方式继续繁殖下去。另外，用稳定期以后的菌体接种，即使接种的菌体全部能够生长，也要出现停滞期。因此，工业发酵中往往要接入处于对数期(特别是中期)的菌体，以尽量缩短停滞期。为了获得代谢产物，菌体尚未达到衰亡期即行放罐处理。随着菌体生长繁殖和产物的形成，基质(如葡萄糖)浓度的变化一般是随发酵时间的延长而不断下降，溶解氧浓度也随发酵过程变化而发生变化。初级代谢产物由于没有明显的生产期，所以它是随菌体生长在不断地生成的，有的与菌体生长成平行关系，如乳酸、醋酸、氨基酸和核酸等。图7-1谷氨酸发酵的代谢曲线　　图7-1表示初级代谢产物谷氨酸发酵过程的代谢变化。变化的根本原因在于菌体的代谢活动引起环境的变化，而环境的变化又反过来影响菌体的代谢。在发酵初期种子刚接入发酵罐中，菌体处于停滞期，以适应新的环境。细胞进行呼吸作用，利用贮存物质合成大分子物质和所需的能量，菌体个体长大，但没有分裂，此时糖等基质基本不消耗或很少消耗，pH值稍有上升是尿素被分解放出氨所致。菌体经过停滞期之后就开始繁殖，并很快进入对数期，代谢逐渐旺盛，菌体大量繁殖，个体生长和群体繁殖循环交替进行，培养物的混浊度(以光密度表示)与菌体增殖情况基本一致，OD值(光密度)直线增长，菌体形态与二级种子相同，绝大多数为“V”形分裂。耗糖速度加快，糖作为碳源和能源用于合成细胞成分和合成反应所需要的能量。尿素被脲酶分解放出氨使pH值上升，氨被菌体