浅谈原发性肝癌患者前X基因分子流行病学意义.docVIP

浅谈原发性肝癌患者前X基因分子流行病学意义【摘要】目的：了解前X基因在HBV相关HCC患者中的流行病学分布、前X基因和HBV基因型与HCC的临床关系. 方法： 患有乙肝的肝细胞肝癌患者（HCC）35例，采用型特异性引物巢式聚合酶链反应进行基因分型.结果： HCC患者35例中B基因型1例，C基因型24例，B/C混合基因型8例，未定型者2例. 明确基因型的患者33例，进一步扩增前 结论： HCC患者中C基因型、B/C混合基因型较为多见. 前?X多肽在HCC患者中有较高的编码率，前?X区多肽可能和HCC之间有一定相关性. 【关键词】肝炎病毒；乙型 基因型前；X基因；癌肝细胞 【Abstract】Objective: To understand the former X gene in HCC patients with HBV-related epidemiological distribution, before the X gene and HBV genotype and clinical HCC. Methods: People with hepatitis B patients with hepatocellular carcinoma (HCC) 35 例using type-specific primers nested polymerase chain reaction genotyping. Results: HCC in 35 patients with genotype 1 case B, C genotype of 24 patients, B / C mixed genotype in 8 cases, 2 cases were not finalized. 33 patients with genotype specific, and further amplified before the conclusion: HCC patients with genotype C, B / C mixed genotype is more prevalent. pre ? X peptides in HCC patients have a higher encoding rate, the former ? XDistrict peptides may be some correlation between HCC. 【Key words】Hepatitis B virus genotype pre ? X gene hepatocellular carcinoma 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）在其负链上含4个部分重叠的开放读码框架（open reading frame, ORF）即前S/S区、前C/C区、P区和X区，分别编码7种性质不同的蛋白如HBcAg，HBeAg，HBsAg等. 有研究表明，X 区编码的HBxAg与肝细胞肝癌（HCC）的形成密切相关。 研究证实，在X ORF的上游还存在一个新的ORF即前?X ORF，而关于其的功能研究尚不多见，是否具有类似功能尚不确定，我们对前?X ORF功能进行初步探讨. 1对象和方法 1.1对象2004?01/2004?12 HBV DNA阳性的HCC患者35例. 所有患者均经B超、CT和核磁共振（MRI）或血管造影等临床诊断为乙肝相关性肝癌，采用蛋白酶K、酚?氯仿?异戊醇法提取血清HBV DNA. 乙肝标志物的测定均采用ELISA法检测，试剂由华美生物工程有限公司提供. 生化指标（ALT）由我院全自动生化检测仪常规测定. 1.2方法通过比对不同HBV基因型序列以及参考Natio等设计的6种主要基因型的分析方法，设计了共同的外引物P1, P2，进行PCR扩增，并以扩增产物为模板进行基因型特异性内引物扩增. 基因型特异性内引物扩增分为A，B两组，其中A组包括共有的上游引物P3, PA（基因型A特异性下游引物）, PB（基因型B特异性下游引物），PC(基因型C特异性下游引物），B组包括上游引物P4以及基因型D, E, F的特异性下游引物PD, PE, PF，同时行PCR扩增. 取第2轮PCR扩增产物5 μL经过20 g/L琼脂糖凝胶电泳后判断HBV基因型，根据电泳结果判断HBV基因型. 以35例HCC患者中明确HBV基因分型的33例患者HBV DNA溶液为模板，根据前X上游引物Px1,下游引物为Px2，扩增前?X区. Px1下游第31?33 nt处为前?X区起始密码子ATG，Px2上游30?32 nt处为X区起始密码子ATG，扩增的靶区域全长231 nt，其中前?X区全长为168nt. 将PCR