照射时间延长对小鼠Lewis肺癌凋亡影响初步观察.doc

照射时间延长对小鼠Lewis肺癌凋亡影响初步观察【摘要】目的 模拟IMRT照射模式,观察照射时间延长对小鼠Lewis肺癌凋亡的影响及Caspase-3表达的变化。方法 将荷Lewis肺癌C57BL/6 雄性小鼠40只随机分为假照组、常规照射组(A组)、IMRT模拟组(B1组和B2组)4组,照射后取出肿瘤,测细胞凋亡率,及Caspase-3表达。结果 各组凋亡率的差别有统计学意义(F=41.83,P 1.2 主要试剂和仪器 PI染液和兔抗鼠Caspase-3单克隆抗体购于北京中山生物技术有限公司(美国Santa Cruz Biotechno-logy公司提供)。Triton-x-100购自北京中衫金桥生物技术有限公司。Varian 23EX408高能直线加速器由青岛大学医学院附属医院肿瘤中心提供。美国BD公司出品FACSort流式细胞仪。荧光显微镜(BH-2型)为日本OLYMPUS产品。 1.3 实验方法 1.3.1 荷瘤小鼠模型的制备 将种鼠断颈处死后, 在无菌条件下分离出生长良好的肿瘤组织, 用0.9% 生理盐水洗净血性物后, 用天平称重。剪碎后按1 g肿瘤组织加入0.9% 生理盐水3 m L的比例, 经砚磨成均浆后经200目筛网过滤, 0.4%台盼蓝染色,活细胞拒染,死细胞则被染成蓝色,显微镜下计活细胞数,用生理盐水稀释为2.8×106 mL-1,制成瘤细胞悬液,将0.2mL 的瘤细胞悬液接种到健康小鼠右腹股沟皮下。接种后1 周, 肿瘤体积为(0.65±0.01) cm3, 随机分组进行实验[4]。 1.3.2实验分组荷lewis肺癌的C57BL/6 雄性小鼠40只随机分为假照组、常规照射组(A组)和2个IMRT模拟组(B1和B2组)4组, 10只/组。 1.3.3 照射方法 将小鼠(包括假照组小鼠) 用10%水合氯醛(350 mg/ kg)经腹腔麻醉后, 用胶布固定在固定板上,记号笔标出小鼠肿瘤体表定位,在瘤体上放1cm厚凡士林纱布补偿, 用美国Varian 23EX408高能直线加速器产生的6MV-X线垂直照射靶区,源皮距为100 cm,剂量率为6Gy/min,照射野均为2.0 cm ×2.0 cm , 总照射剂量15Gy,小鼠均在清醒状态下照射。(1) A组分3次照射,照射间隔时间1.7分钟,总时间6min; (2)B1组:分5次照射,照射间隔时间 7.0分钟,总时间30分钟;(3)B2组:分5次照射,照射间隔时间10.5分钟,总时间45分钟;各组总照射剂量相同。照射后的小鼠根据分组情况,用小鼠笼携回动物房喂养,24小时后全部小鼠脱颈处死。 1.3.4 细胞凋亡及Caspase-3的检测 剥离肿瘤组织,去除坏死组织,剪碎后70%乙醇固定,洗涤后再过滤,加入RNA酶水浴PI染色,上机检测细胞凋亡率;加入0.1%Triton-x-100,洗涤后,加入Caspase-3单抗,上机检测。 1.4 统计学方法 所有数据均用 ±s表示。采用SPSS 13.0 for windows 统计软件包,进行单因素方差分析, P 参考文献 [1]殷尉伯,田凤华.2001年全国放射治疗人员及设备调查报告[J].中华放射肿瘤学杂志,2002,11(3):145-147. [2]陈杰,程惠华.立体适形调强放射治疗进展[J].福州总医院学报,2006,13(3):125-129. [3]刘阳.三维适形放射治疗中的物理学与生物学[J].实用肿瘤学,2006,20(4):350-352 [4]Wang J Z,Li X A,D Souza W D,et al. Impact of prolonged fraction delivery times on tumor cont rol A note of caution forintensity-modulated radiation-therapy(IMRT)[J].Int J Radiat Oncol Biol:Phys,2003,57(2):543-552 [5]王鑫,等.精确放疗所面对的生物学问题[J].中华肿瘤防治杂志2006年5月第13卷第10期:101～104. [6]Florian Serzing.Radiobiological investigation of dose-rate effects in intensity-modulatde radiation therapy[J].Strahlentherapyund Onkologie,2005,(1):42～48. [7]Mu X ,Lofroth PO,Karlsson M,et al.The