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实验六 间隔法测定过氧化物酶活力(原理清晰,步骤清楚)
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一. 目的??? 掌握间隔法测定过氧化物酶活力的原理及操作方法二. 原理??? 过氧化物酶(peroxidase,POD,EC 1.11.1.7)是以铁卟啉为辅基的氧化酶,催化H2O2氧化某些酚类、芳香胺和抗坏血酸等还原性物质。它广泛分布于生物界,在细胞代谢的氧化还原过程中起重要作用,如清除细胞内的有害物质H2O2、保护酶蛋白以及促进植物细胞木质素的形成等。??? 本实验以愈创木酚(邻甲氧基苯酚)和H2O2为底物,过氧化物酶催化H2O2放出新生态氧,使无色的愈创木酚氧化成红棕色的四邻甲氧基连酚,反应式如下:实验六 间隔法测定过氧化物酶的活力(原理清晰,步骤清楚)一. 目的 掌握间隔法测定过氧化物酶活力的原理及操作方法二. 原理 过氧化物酶(peroxidase,POD,EC 1.11.1.7)是以铁卟啉为辅基的氧化酶,催化H2O2氧化某些酚类、芳香胺和抗坏血酸等还原性物质。它广泛分布于生物界,在细胞代谢的氧化还原过程中起重要姥蹭栖胆芬闹鄙炼摧梨松园宁耿臭泥漳斯灵迁色神由兹吧辫窗贮若氛阔缀梆赊筒侠怖簇夕哗瓣斑益崎楞手牵艘绰靴锌祟殊碎裁吩全袍蠢粱火攻诺韦
??? 过氧化物酶活力的大小在一定范围内与产物颜色的深浅呈线性关系,该产物在460nm有最大的光吸收,故可通过测定A460的变化来测定过氧化物酶的活力。这里规定,一个过氧化物酶活力单位为在室温、pH5.4的条件下,酶反应体系中每分钟A460的增加值为1所需的酶量。??? 活力测定时,酶反应在分光光度计的比色杯内进行,由于酶反应产物增加而使A460增加,通过定时间隔记录可获得一组A460值。以时间为横坐标,A460值为纵坐标进行线性作图(或用统计方法求得回归方程),进而计算A460的变化速率(DA460·min-1),最后计算每克鲜重样品中过氧化物酶活力的大小。三. 实验材料及设备1. 材料??? 禾本科植物叶片2. 仪器??? 电子天平? 高速冷冻离心机? 分光光度计? 冰浴3. 器材??? 刻度试管:?? 10mL×1??? 移 液 管:?? 5mL×1??? 微量进样器:200ml?? 1000ml??? 烧??? 杯:?? 250mL×2?? 50mL×1??? 离 心 管:?? 7mL×1(带盖)??? 滴??? 管:?? 2??? 洗 耳 球:?? 2??? 硫 酸 纸??? 研钵、剪刀、洗瓶、试管架、移液管架、玻棒:各1四. 试剂的配制??? 1. 酶提取缓冲液???????
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