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根系活力测定[TTC法]
根系活力的测定[TTC法]
制作人:刘新
单 位:生命科学学院 植物生理学教研室
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一、实验目的
H2O
无机盐
合成氨基酸和植物激素(ABA、CTK、GA等)
根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量
测定根系活力,为植物营养研究提供依据。
理解植物根系活力的内涵
掌握根系活力测定的原理与方法
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二、实验原理
氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙 (TTF)。
生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化
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TTC
TTF
根系活力
脱氢酶
丙二酸
碘乙酸
琥珀酸
延胡索酸
苹果酸
(无色,溶于水)
(红色,不溶于水)
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三、实验材料
水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
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四、实验步骤—制作TTC标准曲线
吸取0.25mL TTC加入10mL容量瓶
Na2S2O4
加少许Na2S2O4
乙酸乙酯
乙酸乙酯定容
0.25mL
0.50mL
1.00mL
1.50mL
2.00mL
乙酸乙酯作参比,测定485nm下光密度值,绘制标准曲线
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四、实验步骤—测定根系活力
0.5g根尖样品
0.4%TTC和磷酸缓冲液的等量混合液10ml
根充分浸没于溶液中
37℃下暗保温1~3h
加入1mol/L硫酸2ml
取出根吸干水分
与3~4ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎
红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml
空白试验作参比测485nm下吸光度
与此同时做一空白实验,先加硫酸,再加根样品,其他操作同上
查标准曲线,求四氮唑还原量
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五、实验结果
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六、思考题
1.植物的根与地上部分有何关系?
2.反应中加入硫酸、琥珀酸或延胡羧酸、苹果酸各起何作用?
3.测定根系活力时最好选择根的哪个部位?为什么?
4.为什么要以杀死根系作为空白对照?
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