还原糖与总糖含量测定.docVIP

还原糖和总糖的含量测定 ——3,5-二硝基水杨酸比色法 一、目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 仪器 规格(mL) 数量 刻度试管 25 11 烧杯 100/250 6/1 锥形瓶 100 1 容量瓶 100\250 4\1 量筒 50 2 棕色瓶 1 水浴锅 1 离心机 天平 分光光度计 1 试剂 规格 葡萄糖标准液 1mg/mL 3，5-二硝基水杨酸（DNS） 碘-碘化钾溶液 酚酞指示剂 HCI 6M NAOH 6M 材料：小麦面粉；精密pH 试纸 四、操作步骤 1. 制作葡萄糖标准曲线 取7支20mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 表1 葡萄糖标准曲线制作 2. 样品中还原糖和总糖的测定 （1）还原糖的提取 准确称取3.00g 食用面粉，放入100mL 烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL 蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移到50mL 离心管中，于4000r/min下离心5min,沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 （2）总糖的水解和提取 准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加热水解30min（水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查）。待三角瓶中的水解液冷却后，加入1 滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH 中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液。 （3）显色和比色 取4支20mL 具塞刻度试管，编号，按表2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。 五、结果与计算： 计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。