酶法制备低聚木糖中木二糖的提纯与色谱鉴定杨本宏.pdf

　第 30 卷 第 4 期 　 工 　业 　微 　生 　物 　Vol . 30 No . 4 　 2000 年 12 月 Industrial Microbiology Dec . 2000 酶法制备低聚木糖中木二糖的提纯与色谱鉴定 杨本宏 , 刘 　斌 , 吴 　克 , 蔡敬民 , 张 　洁 , 居 　萌 , 潘仁瑞 (合肥联合大学生化系 , 合肥 230022) 摘 　要 　半纤维素经木聚糖酶水解得到混合的低聚木糖 ,用葡聚糖凝胶柱 Sep hadex G - 10 层析分离后 ,出现四个组分峰 ,经高效液相色谱分析鉴定 ,其中 3 号峰为木二 糖纯组分峰 。结果表明:利用 2 . 5 cm ×120 cm 凝胶柱 , 以蒸馏水为流动相 ,流速为 10ml/ h ,在室温下 ,可以分离出高纯度的木二糖 。 关键词 　木聚糖酶 ; 　低聚木糖 ; 　木二糖 ; 　凝胶层析 ; 　高效液相色谱 　　目前 ,开发功能性低聚糖产品正成为研 解后 ,酶解液用葡聚糖凝胶 Sep hadex G - 10 究热点 ,低聚木糖是其中之一 。低聚木糖是 柱层析技术分离提纯木二糖及其高效液相色 由2～9 个木糖以β ( ) - 1 ,4 糖苷键连接而成的 谱 HPL C 分析鉴定 。 低聚糖 ,它除了具有低热 、稳定 、无毒等特性 1 　材料与方法 外 ,还具有独特的生理功能 。它促进人和动 物肠道内双歧杆菌的增殖 ,抑制有害菌的生 1. 1 　材 　料 　 长 , 并能促进钙的吸收[ 1～3 ] 。因此 , 将低聚 1. 1. 1 　菌株 木糖作为功能性食品添加剂 ,具有开拓市场 ( ) 黑曲霉 A sp erg il l us niger , 由本课题组 的前景 。 自行筛选和保存 ,并用于木聚糖酶的生产 。 ( ) 半纤维素经木聚糖酶 EC. 3 . 2 . 1. 8 水 1. 1. 2 　半纤维素的制备 解后 ,产物为多种低聚木糖的混合物 ,其中还 将粉碎并过筛的玉米芯原料 ,用清水充 有少量的木糖和阿拉伯糖 。在低聚木糖的生 分浸湿溶胀后离心去除水分 。此时原料中水 产过程中 ,为了对反应过程进行控制和优化 溶性物质大部分被脱去 ,再以 10 : 1 (v/ w ) 的 以及对产品得率进行分析 , 需用标准的低聚 液固比,加入碱 ,碱浓度控制在 3 %～10 % , 糖对产品进行定量测定 ,木二糖则是常用的 室温下 ,搅拌浸提 15～30 h 。温度 70～90 ℃ 标准试剂 。而木二糖作为生化试剂 , 国内尚 时 ,搅拌浸提 1～3 h 。离心去除固形物 ,收集 无正式产品 ,供色谱标准用的进 口木二糖价 滤液 ,并用磷酸缓冲液中和至微酸性 。 格昂贵 , Sigma 公司纯度为 95 % 的木二糖 1. 1. 3 　木聚糖酶的生产和制备 5mg 的售价超过 2000 元人民币,这就大大提 木聚糖酶生产采用固态发酵法 ,参见文 高低聚木糖研究和开发的成本 。因此 ,分离 献[5 ] ;酶制剂的制备参见文献[6 ] 。 提纯木二糖是很具有经济价值的。在众多