膜蛋白的表达也能轻松实现.PDFVIP

膜蛋白的表达也能轻松实现 膜蛋白在细胞间接触、表面识别、信号转导、酶活性和运输方面都扮演着重要的角色。由于它 们功能多样，也就成为理想的药物靶点。然而，对于膜蛋白的研究一直是很有挑战性的，因为它们 的表达对细胞来说可能是毒性的，或者是表达中形成包涵体，因此蛋白产量不高，而反反复复的优 化又相当耗费时间。缺乏理想的实验手段像一座屏障拦住了许多研究者。 不过技术总在进步，新产品也不断涌现。 高产量 Invitrogen 利用 Invitrogen 最近就推出了MembraneMax™蛋 MembraneMax™蛋白表达试剂盒试验了许 白表达试剂盒，帮助你克服以上的挑战，得到 多种不同大小（8-51kDa ）和复杂度（2-7 个 高产量可溶性的膜蛋白。它的秘密武器就在于 跨膜结构域）的膜蛋白表达，如血型糖蛋白、 其中专利的MembraneMax™试剂。 细菌视紫红质等，发现大部分蛋白产量都大于 0.1mg/ml，这对于很多下游应用来说都是足 MembraneMax™试剂 （图1 左上）与 够的。 细胞膜有点类似，是优化的脂-蛋白配方，包 含纳米脂蛋白颗粒（nanolipoprotein 蛋白可溶性增强 蛋白表达中最常见的 particles，NLPs）。NLPs 是圆盘形的颗粒， 问题就是重组蛋白可溶性低，经常以包涵体形 直径约为10nm，外环是一种专利配方的支架 式出现，对于膜蛋白来说尤其如此，因为它拥 蛋白，中间是脂双层。它提供了与细胞内相似 有多个亲水和疏水结构域以及复杂的折叠元 的环境，帮助膜蛋白正确折叠（图1 右下 膜 件。MembraneMax™试剂则提供了一个更好 蛋白嵌在其中），避免了蛋白聚集，同时也省 的环境，帮助膜蛋白正确折叠。 去了反复优化的繁琐步骤。与Invitrogen 的 操作简便 将编码膜蛋白的基因克隆到 Expressway 体外表达系统结合， T7 大肠杆菌表达载体上，然后将载体与大肠 MembraneMax™试剂就能生产出微克至毫 杆菌提取物、MembraneMax™试剂混合，孵 克级的可溶膜蛋白。在蛋白合成结束之后，膜 育2 小时，就可以进行纯化了（图2 ）。一天 蛋白可以从脂双层的任一侧取出。 之内你就能得到毫克级的可溶膜蛋白了。操作 非常简单，因此很容易升级到多个样品的高通 量表达筛选或某个膜蛋白的大规模生产。试剂 盒中包含了表达所需的所有组分和对照载体， 不过不包含表达载体和检测用的抗体，以及纯 化试剂，需要单独订购。 图1 MembraneMax™试剂 第 7 页，共 21 页 下一页 返 回 图2 实验步骤概览 MembraneMax™试剂有两种形式： 势： native MembraneMax™和His-tagged