奶牛布鲁氏菌的PCR鉴定.PDF

畜牧与饲料科学 AnimalHusbandryandFeedScience 2009，30(3)：165—167 奶牛布鲁氏菌的PCR鉴定 伊 日盖 ，申之义 ，李平安 ，范伟兴 ，赵 妮 ，张七斤 (1．内蒙古农业大学，内蒙古 呼和浩特 010018；2．中国动物卫生与流行病学 中心，山东 青 岛 266032) 摘要：采集内蒙古某地区的可疑感染布鲁氏茵病奶牛的乳样及奶牛流产胎儿的肺、肝、脾等相关病料 ，分离并培养出11株 病原茵，经BCSP31一PCR、VirB8一PCR、多重PCR及AMOS-PCR4种PCR方法鉴定，证 实 11株病原茵均为布鲁氏茵，并将 1l株菌定型为牛种5，6，9或3b型。 关键词：奶牛；布鲁氏菌；分离；鉴定；PCR 中图分类号：$858．235．12 文献标识码：A 文章顺序编号：1672—5190(2009)03-0165-03 IdentificationofBrucellainDairyCow byPCR Yirigai，SHENZhi-yi，LIPing-an，FANWei-xing2，ZHAOKu112，ZHANGQi-jin (1．InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Hohhot 010018，China；2．ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，Qingdao 266032，China) Abstract：Themilksamplesandrelativesamplesoflung，liver，spleenetc．inabortedfetusof dairyCOW infectedwithBrucella suspiciouslyinanareaofInnerMongoliawerecollectedandl1pathogenicstrainswereisolateandcultured．11pathogenicstrainswere iden曲 edasBruceUaandconfirmedasB．abortasbiovar5，6，9or3bbyusing4kindsofPCRmethodsasBCSP3l-PCR，VirB8一PCR， multiplexPCRandAMOS—PCR． Keywords：dairycow；BruceUa；separation；identification；PCR 布鲁氏菌病 (Brucellosis)又称马尔他热或波状热 ，简称 1．2．1 分离培养 ：将流产胎儿的肝、脾 、肺及奶牛乳样 ，分别 布病 。是由布鲁 氏菌属(Brucella)~l起的人畜共患 自然疫源 接种于增菌液培养基和肝浸汤培养基内，37cc恒温箱 内培 性传染病，1859年由Morston首次报道。1995年以来，我国 养3—7d，划线转接于胰蛋白月示琼脂培养基和肝浸汤琼脂 人畜布鲁氏菌病疫情有明显回升趋势，局部地区甚至出现 培养基上。置5％～10％CO：环境(燃烧蜡烛法)，37℃恒温箱 疫情暴发，防控形势十分严峻…。内蒙古某地区奶牛群中有 培养35d，然后取出培养皿，观察生长的菌落。 一 定 比例的发生流产、早产 、死胎 、胎盘滞留的疑似布鲁 氏 1．2．2 分离菌的纯化 ：将初步判定为布鲁氏菌的菌落划线 菌病患牛，而且患牛数量在不断增加。不仅给奶牛养殖户带 转接于胰蛋白月示，琼脂培养基上．分别置于大气条件和体积 来了重大的经济损失，而且还严重威胁着人民群众的身体 分数为5％～10％C0环境条件下，37℃恒温箱培养 3～5d。 健康。 将培养物纯化后的细菌再次进行染色镜检 ，以进一步确定 试验针对该地区采集流产胎儿的肝、肺 、脾等病料及有 细菌为布鲁氏菌纯培养物。 可疑感染布鲁氏菌病的奶牛乳样 ．进行了布鲁氏菌的分离 1．2．3 细菌 DNA的提取 ：将布鲁氏菌菌液灭活之后