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血栓与止血临床检验的影响因素
血栓与止血临床检验的影响因素
上海第二医科大学附属瑞金医院
王鸿利 王学锋
上 海 血 液 学 研 究 所
在血栓与止血检验的全过程中,实验结果会受到诸多因素的影响。常见的有受检
者状态、标本采集、抗凝剂与检测试剂盒、设备和仪器、实验方法、操作者技术以及
血小板聚集等七个方面的因素。现分别简述如下。
一、受检者状态的影响
受检者的状态,如被测者生理变化、饮食改变、环境因素、服用药物等引起变化,
在采集血标本时若未注意到这些因素也会对结果做出错误的判断。例如剧烈运动和月
经期纤溶活性增高,高脂肪食物造成血脂升高可抑制纤溶活性,吸烟可使血小板聚集
性增高,饮酒可抑制血小板聚集性。口服避孕药可增加凝血活性、降低纤溶活性,
ticlopidine 、阿司匹林等抑制血小板功能,肝素和口服抗凝剂等抑制凝血机制,尿激酶
(UK )和葡激酶(SK )等可促进纤溶功能等。目前国内应用这些药物者较多,均应注
意。
在实验研究中应用动物血标本,除一般注意事项外,要明了种属差异,尤其在筛选
药物和用动物模型进行药理学研究时更应特别注意。
二、标本采集的影响
标本必须按照规定方法采集(详情参照NCCLS H2l-A2 文件,1991),以保存凝血
因子的全部特性,严格防止凝血因子和血小板被激活。
(一)采血方法 采血前首先要确认病人的身份,并在容器上注明病人的姓名、
性别和病历号,然后再次确认,若可能的话,对于多次反复采血的病人最好在同一条
件下采血,如病人处于静息状态的早晨或早餐前。
对于大多数止凝血试验最好采用双筒注射器采血,但不能使用血气用注射器,因
内含肝素会使凝血试验的结果延长。通常,第一管血液用于其他化学试验,第二管血
液用于止凝血项目的检验。另外,止血带不应扎得太紧,最好不要超过 5 分钟,并应
强调采血顺利,若采血速度缓慢或采血困难,会激活凝血机制,使凝血因子活性增高、
血小板假性降低。为保证实验结果的准确性,最好采用硅化或塑料注射器,其容量误
差要求小于 10%。针头必须采用2l 号以上(外径0.8mm 以上),儿童可用23 号。采
完血后应拔掉针头,沿管壁将血液缓缓注入试管,要避免产生气泡,因为泡沫的产生
可使纤维蛋白原、因子V 和因子Ⅶ变性。然后迅速将血液和抗凝剂轻轻的颠倒混匀,
避免用力振荡而破坏凝血蛋白。
(二)标本的贮存 血液要求采集于塑料或硅化试管中,并采用塑料移液管分离
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血浆。血浆最好贮存在塑料或硅化、带塞子的试管中,因为玻璃可以激活凝血过程,
影响试验结果。未加塞子的试管放置室温会使血液中的CO2 丢失,PH 增高,使凝血酶
原时间(PT )或活化部分凝血活酶时间(APTT )的结果延长。
全血贮存在 4~10 ℃不超过 2 小时,最好在 1 小时内分离血浆。富血小板血浆
(PRP )要求在室温20~25 ℃下,以200~400g 离心10 分钟分离,我国采用800rpm,离
心5 分钟分离。在室温22~24 ℃下,富血小板血浆可存放3 小时。大多数凝血试验采
用乏血小板血浆,应以 1000g 以上离心20 分钟,我国采用2000~2500rpm ,离心30 分
钟分离,以去除全血中的血小板第3 因子(PF3 )、血小板第4 因子(PF4 )和某些凝血
因子。乏血小板血浆在室温22~24 ℃下可存放2 小时,不同存放温度和时间对凝血因
子活性的检测会有不同程度的影响,尤其是对因子VIII 、因子IX 和因子XI 活性会有
较明显影响,结果见表l 。总的看来,冷冻血浆中的凝血因子在越低温度下越稳定。
全部试验不能在4 小时内完成,应将血浆分装在小试管(0.5~ 1.0ml )中快速冷冻,
贮存于-20 ℃或-70 ℃冰箱中。若不冷冻保存可使凝血因子活性异常,导致试验结果
延长,而冷冻过的标本不能再次冷冻,否则结果会不准确。
冷冻血浆融化时,不能在室温中让其自然融化,这样会使纤维蛋白原析出和凝血
因子消耗。应将盛冷冻血浆的容器置37℃水浴中,并轻轻摇动,使其迅速融化。
用于DNA 分析标本,可以用枸橼酸钠或EDTA 抗凝,采血量 l0ml ,离心后去除
血浆,留取500ul 血浆,然后取白细胞、血小板和红细胞层混合液500ul 移至冷冻管
中,-70 ℃或-80℃保存。
(
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