一种鰑鱼诺卡氏菌酪氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆及功能初步-水产学报.pdf

第41 卷 第 7 期 水 产 学 报 Vol. 41, No. 7 2017 年 7 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA July, 2017 文章编号: 1000-0615(2017)07-1017-11 DOI: 10.11964/jfc.20161210654 一种鰑鱼诺卡氏菌酪氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆 及功能初步研究 1,2 1 1 1 夏立群 ， 童邦卓 ， 徐 亮 ， 苏泽杰 ， 1 1 1,2,3* 陈锐敏， 廖保山 ， 鲁义善 (1. 广东海洋大学水产学院，广东 湛江 524088; 2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东 湛江 524088; 3. 广东海洋大学深圳研究院，广东 深圳 518108) 摘要：這鱼诺卡氏菌是鱼类诺卡氏菌病的主要病原，可导致鱼类慢性系统性肉芽肿疾 病。這鱼诺卡氏菌全基因组序列分析发现了一个酪氨酸蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphtase, PTP)基因，生物信息学分析显示该基因很可能编码一个靶向定位于宿主细胞 线粒体的分泌蛋白。本实验对這鱼诺卡氏菌PTP进行了基因克隆、分泌蛋白鉴定、亚细 胞定位、过表达和线粒体膜电位检测，结果显示，在這鱼诺卡氏菌胞外产物中质谱鉴定 到了PTP肽段，证实其为分泌蛋白。亚细胞定位研究观察到PTP-GFP 融合蛋白均匀地分 布在FHM 细胞中，与线粒体分布不重合，说明這鱼诺卡氏菌PTP蛋白并未靶向定位于线 粒体。亚细胞定位和过表达研究都显示PTP蛋白在FHM 细胞中表达后，细胞核出现固缩 浓染、凋亡小体等明显的细胞凋亡特征。通过线粒体膜电位检测表明，在pcDNA-PTP 转 染后48 h ，线粒体跨膜电位被明显破坏，说明這鱼诺卡氏菌PTP很可能是一种可诱导细 胞凋亡的细菌蛋白。通过对這鱼诺卡氏菌PTP开展基因克隆和功能初步研究，为进一步 揭示该基因的功能和深入了解這鱼诺卡氏菌的分子致病机理奠定了基础。 关键词: 這鱼诺卡氏菌；酪氨酸蛋白磷酸酶；分泌蛋白；亚细胞定位；细胞凋亡 中图分类号: Q 785 ；S 941 文献标志码: A 鲪鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡 东南亚地区发病率呈逐年增加的趋势，对水产 [2-4] 氏菌病的主要致病菌，可通过饵料、鳃或伤口 养殖业危害越来越严重 。 等途径感染鱼体，并引发慢性系统性肉芽肿疾 鲪鱼诺卡氏菌为革兰氏阳性菌，在分类学上 [1] 病 。据报道，鲪鱼诺卡氏菌可感染卵形鲳鲹(Trach-