反相高效液相色谱负峰测定法的研究郭治安31赵景婵1闫维洲1.PDF

( ) 第 32 卷 分析化学 FENXI HUAXU E 　研究简报 第 3 期 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 2004 年 3 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 356～359 反相高效液相色谱负峰测定法的研究 1 1 1 2 郭治安 　赵景婵 　闫维洲 　宋俊峰 ( 1 2 ) 西北大学化学系 ,分析科学研究所 , 西安 710069 摘 　要 　用 HPLC 紫外检测器研究了无紫外吸收化合物的负峰测试法 ,探讨了负峰测试法的原理。通过对 乙酸酯系列的 5 种样品的分析 ,确定了负峰测定的基本色谱条件 ,考察了乙酸酯系列测定的灵敏度、精密度、 检出限和线性范围。该法为一些在紫外区无吸收或弱吸收物质的色谱分析提供了一种简捷、方便的手段和色 谱机理研究的新方法。同常规的采用正峰测试样品的方法相比较 ,负峰法应用范围更宽 ,能使紫外检测器变 为一种更通用的检测器。 关键词 　负峰法 ,紫外检测器 ,本底物质 ,反相液相色谱 1 　引　　言 高效液相色谱为一种高分离效率 ,高检测灵敏度的分离分析方法 ,但由于被分析物质的响应信号与 它们的性质有关 ,只有在被分析物质分子中包含有较高的紫外吸光度、荧光光度或电化学活性等结构单 位时 ,紫外检测、荧光检测或电化学检测等高灵敏度的检测器才可用于这些物质的分析测定。如果被分 析物质没有这样的结构单元 ,通常需通过柱前或柱后衍生化反应来解决检测问题1 ～3 。但这将使分析 测试耗时、复杂 ,给测定带来误差 ;有些化合物不易与衍生试剂反应 ,实际上衍生技术也很难完全解决所 有的检测问题。通常高效液相色谱常用的还有示差折光率检测器 ,其检测范围广泛 ,但由于折光率对温 度的变化敏感 ,溶剂也具有折光性能 ,因此折光检测器灵敏度低 ,选择性差 ,噪声大 ,不易平衡 ,使其应用 受到很大限制。本实验根据色谱分离过程中样品组分与固定相、流动相与固定相之间反复分配置换的 特征 ,在流动相中加入适量的有检测响应的物质 ,测定无响应的分析组分 ,所加入的物质称为本底试剂。 由于样品组分与本底试剂在固定相上的计量置换作用4 , 导致检测器对样品组分产生间接的负峰信 号 ,这种负峰的面积与样品量成正比 ,从而达到定量测定的目的。负峰测定法未见报道。 实验所用的检测器为可变波长紫外检测器。采用测定负峰的方法 ,可由紫外检测器代替折光率检 测器 ,对于色谱分析有广泛地应用价值 ; 由于方法是通过色谱过程中溶质和溶剂间的计量置换作用建立 的。因此 ,测试负峰对于研究色谱作用机理也有重要的理论意义。 2 　实验部分 2 . 1 　仪器及试剂 ( ) HP1100 液相色谱仪 美国惠普公司 ,配 DAD 二极管阵列检测器、HP Chemstation 化学工作站、 ( ) G1322A 在线脱气机、G1311 四元梯度泵、G1316A 柱温箱 美国安捷伦公司 ; TCQ250 超声波清洗机 ( ) 北京医疗设备二厂 。 甲醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸异戊酯、萘、萘胺、1 ,5萘二磺酸钠及水杨酸均 为分析纯 ;实验用水为二次蒸馏水。 2 . 2 　试液制备 按一般方法配制流动相 ,再准确加入实验所需的本底试剂配制负峰测定的流动相 ,用 0. 2～0. 4 μ