流式细胞操作规程-中心试验室.DOCVIP

操作规程 一、仪器开机标准操作规程 1．开机之前，分别将鞘液盒及清洁液盒分别加满鞘液和清洁液 ，废液桶倒净。 2．打开稳压电源，如仪器已连接在整体稳压电源上，无需操作此步。 3．开启计算机，仪器自动进入程序，启动流式细胞仪 4．打开电源箱门，检查 WATER TRAP(水陷阱) 、 AIRFILTER（空气过滤器） 、 VACUUM FILTER（真空泵过滤器） ，如有下列情况通知工程师： 4．1 TRAP 超过 1 ／ 3。 4．2 FILTER 有液体 。 4．3SYSTEM VACUUM 表超过－ 17 至－ 25 in.Hg 。 4．4SYSTEM PRESURE 表（系统压力表）如超过 8 － 23psi 之间 。 4．5VACUUM TRAP 如有超过 0.5 英寸液体 。 5．预热三十分钟，仪器提示插入标本管 。 6．按Protocol选择需要的 Protocol（程序），进行光路与流路检测。 7．在QC-保养程序中记录。Clin-L 临床实验室信息网 二、 COULTER EPICS XL型流式细胞仪光路、流路校准 1．将 FLOW- Check液 放在室温下 10 分钟。 2．按Protocol选择需要的 Protocol（程序）。 3．取 0.5ml(15～20滴) FLOW- Check液放在塑料试管内。 临床实验室 4．将试管放在进样台上，仪器自动取数至5000 （ FS ） 5．核查 FS 及所有荧光信号（ FL1、FL2、FL3、FL4 ） 的 HPCV（半峰宽CV）值，核对是否少于2%，是否与以前的记录相符。 6．如FL1、FL2、FL3、FL4 荧光信号 的 HPCV值超过2%，则应检查： 6．1 观察仪器是否预热≥20min。 6．2 按主机上PRIME键，排除气泡干扰后重测。 6．3在Acquisition状态栏下，选择 PANEL 中的 CLEANING – Panel，清洗机器后重测。 6．4若以上处理后，HPCV均未达标，应进行光路调整，由工程师完成。 流式细胞仪主要由以下五部分构成:流动室及液流驱动系统激光光源及光束形成系统光学系统信号检测与存储、显示、分析系统细胞分选系统。 　　l 主要技术指标 　　1.流式细胞仪的分析速度： 　　一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 　　2.流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上600个荧光分子,两个细胞间的荧光差5%即可区分。 　　3.前向角散射(FSC)光检测灵敏度：前向角散射(FSC)反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。 　　4.流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。 　　5.流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。 　　l主要构造和工作原理：流动室及液流驱动系统 　　流动室(Flow Cell或Flow Chamber)是流式细胞仪的核心部件，流动室由石英玻璃制成，单细胞悬液在细胞流动室里被鞘流液包绕通过流动室内的一定孔径的孔,检测区在该孔的中心，细胞在此与激光垂直相交，在鞘流液约束下细胞成单行排列依次通过激光检测区。流动室里的鞘液流是一种稳定流动，控制鞘液流的装置是在流体力学理论的指导下由一系列压力系统、压力感受器组成，只要调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕样品流并使样品流保持在液流的轴线方向，能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、250μm等多种，供研究者选择。小型仪器一般固定装置了一定孔径的流动室。 　　l主要构造和工作原理：激光光源及光束形成系统 　　流式细胞仪可配备一根或多根激光管，常用的激光管是氩离子气体激光管，它的发射光波长488ηm,此外可配备氦氖离子气体激光管(波长633ηm)和/或紫外激光管。 　　流式细胞仪的主要测定信号荧光是由激发光激发的，荧光信号的强弱与激发光的强度和照射时间相关，激光是一种相干光源,它能提供单波长、高强度、高稳定性的光照，正是能达到这一要求的理想的激发光光源。 　　在激光光源和流动室之间有两个圆柱形透镜，将激光光源发出的横截面为圆形的激光光束聚焦成横截面较小的椭圆形激光光束(22μm×66μm)，在这种椭圆形激光光斑内激光能量成正态分布，使通过激光检测区的细胞受照强度一致。 　　l主要构造和工作原理：光学系统 　　流式细胞仪的光学系统由若干组透镜、小孔、滤光片组成，大致可分为流动室前和流动室后两组。流动室前的光学系统由透镜和小孔组成，