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生物化学实验 实验学时：34学时 目录： 实验一、玻璃仪器的清洗和使用（基础实验）学时2 实验二、氨基酸的分离鉴定—纸层析法（基础实验）学时3 实验三、蛋白质颜色反应（基础实验）学时3 实验四、蛋白质的等电点测定和沉淀反应（基础实验）学时4 实验五、血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳（提高性实验）学时3 实验六、酵母核糖核酸的分离及组分鉴定（提高性实验）学时4 实验七、酶的特性（提高性实验）学时3 实验八、血糖含量的测定（提高性实验）学时4 实验九、氨基移换反应－--血液中谷丙转氨酶活性的测定（综合性实验）学时4 实验十、氨基移换反应二--纸层析法（综合性实验）学时4 实验一 玻璃仪器的清洗和使用 一、目的要求： 1、掌握清洗玻璃仪器的正确方法。 2、知道如何配制铬酸洗液。 3、能够正确使用移液管，准确量取一定体积的溶液。 二、实验器材： 试管、烧杯、锥形瓶、移液管等玻璃器皿、试管刷、电炉等。 三、操作： 1、玻璃仪器的洗涤 实验中经常要使用各种玻璃仪器，这些仪器是否洁净，将直接影响到实验的成败与结果的准确性，所以实验前应先把仪器洗涤干净。干净的玻璃仪器应该透明，其内壁能被水均匀润湿而不挂水珠。应根据实验的要求、污物的性质和沾污的程度等选用不同的洗涤方法。现以洗涤试管为例说明。用水洗涤：在试管内装入约1/4的水，摇荡片刻，倒掉，再装水摇荡，倒掉，如此反复操作数次，若管壁能均匀地被水所润湿而不沾附水珠，则可认为基本上已洗涤洁净。洗涤时也可使用试管刷。刷洗时，注意所用的试管刷前部的毛应是完整的，先将它捏住后放入管内，以免试管刷的铁丝顶端将试管戳破。 按上法洗净后，需再用去离子水（或蒸馏水）洗涤，以除去沾附在器壁上的自来水。洗涤的方法一般是从洗瓶向仪器内壁挤入少量水，同时转动仪器或变换洗瓶水流方向，使水能充分淋洗内壁，每次用水量不需太多。如此洗涤2～3次后，即可使用。 用去污粉、肥皂或洗涤剂洗：如果仪器沾污得很厉害，可先用洗洁精等洗涤液处理，或者用去污粉刷洗（但不要用去污粉刷洗有刻度的量器，以免擦伤器壁）。然后用自来水冲洗干净，最后再用去离子水冲洗仪器2～3次。 用洗液洗：如洗涤剂仍不能将污物去除，可采用铬酸洗液。一般可将需要洗涤的仪器浸泡在热的（70℃左右）洗液中约十几分钟，取出后，再用水冲洗。这种洗液用过后如果不显绿色（Cr2＋离子的颜色），一般仍旧倒回原瓶再用，不要随便废弃。铬酸洗液有强烈的腐蚀性，使用时必须小心，防止它溅在皮肤或衣服上。有油渍的仪器可先用热的氢氧化钠或碳酸钠溶液处理。 此外，对于一些不溶于水的沉淀垢迹，需根据其性质，选用适当的试剂，通过化学方法除去。 2、玻璃仪器的常用干燥方法 用有机溶剂快速干燥：先用少量丙酮、乙醇等有机溶剂淋洗一遍，然后晾干。 烤干：将试管、烧杯和蒸发皿等能加热的仪器放在石棉网上，用煤气灯小火烤干。 烘干：把洗净的仪器放到电热烘干箱内（控制温度在105℃左右）烘干。仪器放进烘箱前应尽量把水倒净，并在烘箱的最下层放一搪瓷盘，接受从容器上滴下的水珠，以免水滴直接滴在电炉丝上，损坏炉丝。 吹干：用电吹风机或气流烘干机直接吹干。 晾干：把洗净的仪器置于干净的专用橱内，自然晾干。 四、注意要点： 1、定量的玻璃仪器不能加热烘干。 2、配制铬酸洗液要注意安全，配好后完全冷却再倒入标本缸中被用。 3、注意用移液管取液体的正确操作，注意读刻度的姿势。 实验二 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 一、目的要求： 1、掌握纸层析的一般原理和操作方法。 2、了解氨基酸的特征性颜色反应。 3、学会分析未知样品的氨基酸成分。 二、原理： 纸层析的原理：常以水和有机溶剂作为展层剂；水和有机溶剂互溶后形成两个相：一个是饱和了有机溶剂后的水相，一个是饱和了水后的有机溶剂相。由于滤纸纤维素上的羟基和水分子有较大的亲和力，而与有机溶剂的亲和力相对较弱，因此我们认为水相为固定相，有机溶剂相为移动相。由于物质的极性大小不同，在两相中分配比例有所差异。极性小的物质在有机相中分配较多，随有机相移动较快；而极性大的物质在水相中分配较多，移动相对较慢，从而将极性不同的物质分开。一般来说，在相同的条件下，每种物质都有其固定的Rf值。 Rf =(原点到层析斑点中心的距离)/（原点到溶剂前沿的距离） 用纸层析鉴定样品时，一般都与标准品相比较。若没有标准品，可选择文献记载的该物质层析条件，根据文献Rf值进行鉴定。 三、仪器与试剂： 仪器：层析缸、喷雾器、毛细管、培养皿、层析滤纸（新华一号） 试剂：0.1%（W/V）茚三酮液.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸正丁醇水＝4∶1∶3（V/V）1、纸的处理 取22 cm长、14 cm宽的滤纸一张，离底边2 cm处用铅笔轻轻划一条与底边平行的线，并等距离的在线上定点样点(原点)划圈，使圈