用孕妇外周血诊断胎儿性别.doc

用孕妇外周血诊断胎儿性别 及其在单基因遗传病诊断中的应用 北京市陈经纶中学 翟晶 用孕妇外周血诊断胎儿性别 及其在单基因遗传病诊断中的应用 北京市陈经纶中学 翟晶 摘 要　 通过该课题的研究目的建立一种非创伤性的取材和快速胎儿性别诊断方法, 并应用于单基因遗传病的产前诊断。研究方法采用聚合酶链反应( PCR) 技术, 从2例孕妇和3名正常男性，3名非怀孕正常女性外周血中扩增Y 染色体上SRY基因，X染色体上ZFX基因。结果2例孕妇经PCR 检测, 1例有一条446bpY染色体特异荧光带, 提示胎儿为男性; 1例无此荧光带, 提示胎儿为女性。检测结果与随访新生儿出生性别或引产后外生殖器检查结果完全一致。结论：本方法快速、灵敏而准确, 推广应用对单基因遗传病的产前诊断具有重要意义。 关键词　孕妇血; 胎儿性别诊断; 单基因遗传病; 聚合酶链反应 一、选题背景 单基因遗传病是指受一对等位基因控制的遗传病，有6600多种，并且每年在以10-50种的速度递增，单基因遗传病已经对人类健康构成了较大的威胁。 1、常染色体显性遗传病。人类的23对染色体中，一对与性别有关，称为性染色体，其余22对均称常染色体。同源常染色体上某一对等位基因彼此相同的，称为纯合子，一对基因彼此不同的称杂合子。如果在杂合状态下，异常基因也能完全表现出遗传病的，称为常染色体显性遗传病，如多指并指、先天性肌强直，这类遗传病的发生与性别无关，男女患病率相同。父母中有一位患此疾病，其子女中就可能出现患者。据估计，约7‰新生儿患有常显体显性遗传病。 2、常染色体隐性遗传病。常染色体上一对等位基因必须均是异常基因纯合子才能表现出来的遗传病。大多数先天代谢异常均属此类。父母双方虽然外表正常，但如果均为某一常显体隐性遗传基因的携带者，其子女仍有可能患该种遗传病。近亲婚配时容易产生纯合状态，所以其子女隐性遗传病的发病率也高。 3、常染色体不完全显性遗传病。这是当异常基因处于杂合状态时，能且仅能在一定程度上表现出症状的遗传病。如地中海贫血，引起该病的异常基因为，纯合子 表现为重症贫血，杂合子则表现为中等程度的贫血。 4、伴性遗传病。分为X连锁遗传病和Y连锁遗传病两种。有些遗传病的基因位于X染色体上，Y染色体过于短小，无相应的等位基因，因此，这些异常基因将随X染色体传递，所以称为X连锁遗传病。也分为显性和隐性两种，前者是指有一个X染色体的异常基因就可表现出来的遗传病，由于女性拥有两条X染色体而男性只有一条，所以女性获得该显性基因的机会较多，发病率高于男性，但这类遗传病为数很少，至今仅知10余种。如Xg血型，又如抗维生素D佝偻病是 X连锁不完全显性遗传病。X连锁隐性遗传病是指X染色体上等位基因在纯合状态下才发病者，在女性，只有当两条X染色体上的一对等位基因都属异常时才患病，如果其中有一条 X染色体的等位基因正常就不会患有此病。但是男性只有一条X染色体，只要X染色体上的基因异常，就会表现出遗传病，所以男性发病率高于女性发病率。这种伴性隐性遗传病占伴性遗传病的绝大部分，例如红绿色盲、血友病等都比较常见。据估计约1‰新生儿患有X连锁遗传病。 Y连锁遗传病的致病基因位于Y染色体上，X染色体上则无相应的等位基因，因此这些基因随着Y染色体在上下代间传递，也叫全男性遗传。在人类中属于 Y连锁遗传病的有外耳道多毛症等。 致病基因在X染色体上，性状是隐性的，女性只是携带者，这类女性携带者与正常男性婚配，子代中的男性有1/2是概率患病，女性不发病，但有1/2的概率是携带者。男性患者与正常女性婚配，子代中男性正常，女性都是携带者。因此X连锁隐性遗传在患病系中常表现为女性携带，男性患病。男性的致病基因只能随着X染色体传给女儿，不能传给儿子，称为交叉遗传。 二十世纪中叶以来，陆续有科学家以肿瘤患者为研究对象，证实了循环血中存在游离核酸。根据这些启示，在1997年以妊娠男性胎儿孕妇为研究对象，直接利用母亲血浆DNA扩增出Y染色体上的DYS14序列，证明了母体血浆中存在胎儿游离DNA。 三、研究过程 1．实验材料 DNA模板：孕妇外周血2例取自北京世纪坛医院 李永超（男），张小寒（男），杜家成（男） 陈爽心（女），李宏璐（女），翟晶（女） DNA 聚合酶，PCR Mar kers(Genstar) PCR引物：上海生工 2．研究方法 2. 1　模板DNA 制备　 取0. 5ml 新鲜抗凝血置于1. 5ml Eppendor f 管内, 离心保留白细胞, 加入100Ll 1%TLS 室温10min, 分别加入饱和酚、酚/ 氯仿