苏云金芽孢杆菌LZS9408伴孢晶体的形态特征研究 - yzxzcom.DOCVIP

苏云金芽孢杆菌LSZ9408伴孢晶体的形态特征研究 黄素芳，朱育菁，刘波*，阮传清，林捷 (福建省农业科学院生物技术研究所，福州 350003) 摘要：本文通过对虫体复壮前后BtLZS9408菌株伴孢晶体的形态结构观察、杀虫毒力测定，发现BtLZS9408伴孢晶体以菱形结构为主（比例85%），其余为正方形结构（比例占3％）、不规则结构（比例12％）；虫体复壮后菌株伴孢晶体中菱形结构比例提高、不规则结构比例下降，菱形晶体平均轴长增大，杀虫毒力显著提高。 关键词：苏云金芽孢杆菌，LZS9408，伴孢晶体，形态特征，毒力 中国分类号： 文献标识码： Study on morphologic characteristics of parasporal crystals of Bacillus thuringiensis strain LSZ9408 HUANG su-fang，ZHU yu-jing，LUI boAbstract: The present paper deals with the morphology and toxicity of parasporal crystals of Bacillus thuringiensis strain LSZ9408, which has been rejuvenated by infecting Plutella xylostella L. The results showed that the crystals produced by LSZ9408 shaped in several types, with bipyramid-shaped crystal occupying more than 85% of all, the square and flat shaped occupying 3% and other irregular shapes less than 12%. The data displayed that bipyramid-shaped crystal increased and became bigger after rejuvenation, while other shape crystals reduced. The toxicity of LSZ9408 was also improved by the rejuvenation. Keywords：Bacillus thuringiensis(Bacillus thuringiensis Berliner，简称Bt，下同)是目前世界上用途最广、产量最大的微生物杀虫剂，占微生物杀虫剂总量的95％以上[1]。Bt LSZ9408菌株是本研究室经过长期实验筛选出的对小菜蛾、甜菜夜蛾等鳞翅目害虫具有较高毒力的菌株，属库斯塔克亚种(B．thuringiensis var．kurstaki)，血清型为H1，它的主要有效杀虫成分为伴孢晶体[2]。伴孢晶体是杆菌发育至芽孢期伴随着芽孢产生的一种蛋白质物质，它的形状、结构、大小与其杀虫毒力密切相关。本文拟通过研究虫体复壮前后BtLSZ9408菌株伴孢晶体的形态特征变化，探索其与杀虫毒力之间的关系，为菌株的开发利用研究提供基础数据。 1 材料与方法 1.1 材料 虫体复壮前后BtLSZ9408菌株，由本研究室保存和提供。培养基为NA培养基。小菜蛾由本研究室室内繁殖饲养。人工气候箱(哈东联，HPC-280H)，隔水恒温培养箱（上海）,光学显微镜（奥林帕斯，BX-51），电镜（日立，H-600）。 1.2 伴孢晶体的制备 参照李梅云[3]的方法，分别将虫体复壮前后的BtLSZ9408菌株从斜面上取出一环，在茄形培养瓶中划线接菌，置37℃下培养4d，用100mL无菌水将菌苔洗下。倒入灭菌的装有玻璃珠的三角瓶中，置快速混匀器振动使菌苔分散，二层纱布过滤，滤液经10000r/min离心5min，收集沉淀，加入生理盐水，搅匀，置超声波仪中400W处理，每次处理30 s，间歇30 s，共处理10次．采用上述离心条件离心，生理盐水洗涤，再离心，收集沉淀．按70 mg沉淀每毫升蒸馏水制成悬液，转入分液漏斗，加入1% Na2SO4溶液及CC14，晶体悬液、1% Na2SO4 和CC14 三者的体积比为7：6：7，振荡约10min，静置约5min，待双相分层，立即将水相吸出。水相用同量CC14再提纯一次。将二次提纯的水相离心5min，弃上清液，沉淀用双蒸水洗一次，离心，收集沉淀物。将沉淀物涂片，采用碱性品红染色，通过光学显微镜观察计数，计算出晶体的纯度。提纯后的沉淀物与初始沉淀物重量比为晶体得率。 1.3 伴孢晶体形态特征观察 将提纯的晶体用5％ 丙酮洗涤3次，再用双蒸水洗