100万株组培苗工艺流程设计.doc

100万株组培苗生产工艺流程设计 学 院：生物科学与工程学院 姓 名：练小龙 学 号专 业：生物技术 实验日期：2011/10/22 100万株组培苗生产工艺流程设计 一．实验目的：组培室建设首要考虑的问题就是组培室需要哪些设备条件和需要什么样的培养条件。对这些有了全面了解以后，我们便可以因地制宜地新建或利用现有房屋建设实验室。在设计组培室时，一般情况应按组培的流程来设计，同时考虑人物分流顺畅，空间合理利用。植物组织培养要求严格的无菌的条件，需要一定专业仪器设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。1、组培快繁车间： ①预处理室 ②试剂室 ③培养基制备室 ④灭菌室：高压蒸汽灭菌锅 ⑤接种室：超净工作台⑥培养室 ⑦观察检测室 2、试管苗移栽车间：温室、大棚等 3、大田圃苗培育车间：温室、大棚等 缓冲间 培养基 配制室 灭菌室 无糖培养间 四、准备工作： （1）选择育苗容器：一般采用穴盘，带根苗需穴格较大，扦插苗则需穴格较小。 （）基质选配：①具备良好的物理特性：保水透气； ②具备良好的化学特性：稳定、无毒、PH值及电导率等适宜； ③物美价廉，便于就地取材。（）基质的种类：①有机基质：泥炭、椰糠、花生壳、木屑等； ②无机基质：蛭石、珍珠岩、次生云母矿石、河沙、炉渣等。 （）场地、工具及基质灭菌、装盘：①场地、工具灭菌：多采用化学药剂灭菌； ②基质灭菌：多采用蒸汽灭菌或化学药剂灭菌； ③基质装盘（）营养液的配制：①营养液的成分：大量、微量等 ②营养液常用药品的来源：实验研究需分析纯，规模化生产用化学纯或工化合物； ③营养液配方；④植物营养液的配制工艺流程: 1．培养瓶洗涤 先将其中培养基冲干净,然后在清水中浸泡1小时,刷洗瓶内污物,泡入1%的洗衣粉溶解液中,再进行刷洗,尤其是瓶口处也要认真刷洗.刷洗完后于水龙头下以流水冲洗干净.最后倒置于洁净的器皿篮中,以便沥干水分. 2．培养瓶浸泡培养瓶常规洗净后，浸入每升自来水加0.15 ml的S105溶液中1.5-2小时，以浸没培养瓶为度。用时捞起培养瓶及瓶盖倒扣滤干水即可。 3．培养基配制。 依照所设计的培养基配方，按比例吸取母液注入容量瓶内，加水定容，倒进不锈钢锅内加S106抗菌剂‵凝固剂和糖。边加热边搅拌以免煮糊，使凝固剂和糖完全溶解。用盐酸或氢氧化钠溶液调整pH值，煮沸。或（ 依照所设计的培养基配方，按比例吸取母液和S108注入量杯内。量取1升水和30克白糖、3—4克琼脂放入锅内煮沸后，倒入装有母液的量杯内搅拌匀即可分装） 4．培养基分装。 将培养基趁热均匀分装到培养瓶内，盖好瓶盖。 把培养瓶放平，凝固后可进行接种. 5.外植体消毒。 首先将外植体用自来水冲洗干净。幼嫩的外植体材料（如幼叶、幼芽、幼茎段）幼嫩的材料可用50%酒精消毒8---10秒，自来水冲洗2次。再用0.1%HgCl2溶液加“吐温-80”两滴，浸没材料，轻微摇动，消毒5-8分钟，再用自来水冲洗4-5次。老的材料（如半木质化、木质化的茎段）70%酒精消毒8---10秒，自来水冲洗2次。再用0.1%HgCl2溶液加“吐温-80”两滴，浸没材料，轻微摇动，消毒5-8分钟，再用自来水冲洗4-5次。最后浸泡在100ml的消毒液（100ml自来水中加入1ml S107和1ml S106）中15-30分钟。 6．包括取苗、切苗和接苗三步。 1)、工作环境：可选择干净整洁的房间，一张合适的桌子、一把椅子，准备好一个不锈钢小托盘或一块清洁的玻璃，两把手术剪刀、两把手术刀、两把镊子、一个装有适量70%酒精的广口瓶（高度适当低些，便于接种工具浸入、取出），一包药棉、一个工具架和一个废纸篓。 2)、接种过程： ①接种前；工作人员必须肥皂洗手 ②将培养瓶、瓶苗、手术刀、镊子、70%酒精广口瓶、药棉、工具架、无菌垫板等，整齐合理地摆放在桌子上。 ③将瓶苗取出，放在经70%酒精消毒的无菌垫板上，进行接种材料的切割，每接种完一瓶，把残渣倒入废纸篓，用蘸有70%酒精的药棉擦拭数遍，不留盲区，板面酒精稍干后，进行下一瓶接种材料的切割。 ④切割材料的刀、剪、镊子等，每接种完一瓶，用药棉擦干净叶碎片、琼脂，浸泡在70%的酒精中。 ⑤接完后盖紧瓶盖. 7组培　培养条件在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、ＰＨ值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组培苗的生长和发育。 （一）温度 温度是组织培养过程中的重要因素。 组织培养在最适温度下生长分化表现良好， 大多数组织培养都是在23～27之间进行，很多研究者采用了25±２的恒温条件。低于15时培养，组织会表现生长停止，高于35时对生长不利。但是，不同植物培养的适温不同。百合的最适温度是20、月季是25～27