胞内游离Ca测定方法.docVIP

Pluronic F-127 (F127)美国Molecular Probes Inc.产品。Ultima型共聚焦激光扫描显微镜为美国 MERIDIAN Instruments Inc 产品。1. 光源：Ultima型50Mw UV,200Mw Visible2. 激发波长：351-364nm，488nm，514nm3. 扫描系统：Ultima为台阶扫描，精度0.1um目的：监测细胞胞浆中游离钙的动态变化原理：正常细胞内游离钙浓度[Ca2┼]i为0.1 umol/L,胞外钙离子浓度为1.2-1.3mmol/L,相差达10000倍。胞外钙内流和胞内钙库动员形成的钙震荡(钙峰或钙波)在各种生理过程中起重要作用；病理状态下细胞内钙超负荷将造成一系列代谢紊乱,直至细胞坏死或凋亡；钙离子通道阻断剂已广泛应用于临床。显而易见,测定[Ca2┼]i在生理学、病理学和药理学等研究工作中均具有重要意义。Fluo-3/AM等钙离子荧光染料以脂溶性的乙酰甲氧基酯（AM酯）的形式导入细胞，在胞内水解酶的的作用下水解成游离酸，与钙离子的结合物在激发光作用下能产生特异的荧光。荧光信号的强弱随钙离子浓度的变化而变化。 100ug Fluo-3/AM 溶于 100ul DMSO中，就是1ug/ul,1mg/ml,1g/L 方法：1.预先用二甲基亚砜(DMSO)将Fluo-3/AM配制为1mmol/