耦合法的分析玉米叶绿体Trx调节靶蛋白氧化还原态与其活性.pdf

摘要 氧化还原信号调节是一种主要的蛋白翻译后修饰方式，它通过介导巯基和二硫键 的可逆形成调节靶蛋白的活性，参与生物对外界环境的应答、抵御逆境胁迫等多种生 物过程，是：近些年蛋白活性调节研究的热点。植物中的氧化还原信号调节系统主要存 在于细胞质、叶绿体和线粒体内，主要通过硫氧还蛋白(嗽)介导的氧化还原系统 来实现对靶蛋白活性的调节。叶绿体是植物光合作用的丰要场所，其氧化还原系统比 细胞质、线粒体更为复杂。玉米是C4作物，具有较高的光合作用效率，研究玉米叶 绿体氧化还原系统对玉米的高产、抗逆性等意义重大。本研究通过纯化重组叶绿体氧 化还原调节系统相关蛋白——依赖NADPH的铁氧还蛋白还原酶(FNR)、硫氧还蛋 白还原酶(NTR)等蛋白，研究叶绿体TⅨ对靶蛋白的调节效应，建立体外分析TⅨ 对靶蛋白调节效应的技术体系，获得了以下结果： 1．克隆了玉米FNR2的编码基因，构建了3种分别带有N端组氨酸标签、suMO 标签和C端组氨酸标签的FNR2基因大肠杆菌融合表达载体。在大肠杆菌中表达并纯 蛋白在大肠杆菌中不表达；表达并纯化的带有C端组氨酸标签的FNI也蛋白经 SDS．PAGE检测显示为一条主带，亚基分子量大小约为35kD；带有SuMo标签的 测显示为一条主带，亚基分子量大小约为35