维生素含量的测定.docVIP

维生素C含量测定 1、2,6-二氯酚靛酚滴定法 2、碘量法 3、2,4-二硝基苯肼比色法 碘量法 VC在水果中主要以还原型存在(还有氧化型及少量结合态)，因此通常测定的是还原型VC J。VC属于不稳定维生素，尤其是在液态时，易被热、碱、氧和光破坏，氧化型VC更不稳定，在测定中易受杂质的干扰。采用二氯酶法测定VC极不稳定，易受到还原性杂质的干扰，所以测定VC的准确性很大程度上取决于分析技术。选择合适的提取剂可以延长VC的稳定时间，提高VC的提取效率。VC在酸性溶液中相对稳定，因此试验中采用2％的偏磷酸、2％草酸、10％三氯乙酸、2％草酸+10％盐酸溶液作为提取剂，分别对5种水果中的VC进行提取，并采用碘量法测定其含量。 1 试验原料与试剂 1．1 原料 草莓、鲜枣、香蕉、西瓜、桃：市售，长春本地产。 1．2 试剂 1％淀粉指示剂，0．01 mol／L的碘溶液，2％偏磷酸，2％草酸，10％三氯乙酸，2％草酸+10％盐酸。 2 工作原理 碘可将VC氧化，且2分子碘可氧化1分子VC，碘遇淀粉变蓝，C2H8O6+2I2!=C2H4O6+4HI。在提取的水果样液中加人淀粉指示剂，用 0.01mol／L碘标准溶液进行滴定。当样液变蓝且保持15 S不褪色时，记录所用碘液的体积，计算得VC的含量【 。 3 步骤与方法 3．1 样品的制备 取各水果样品400 g清洗、沥干，将每份样品平均分成4份，即每份100 g，用破碎机破碎。在破碎的同时加人提取剂，以减少VC损失。之后，用榨汁机榨汁，然后每份样品分别用2％偏磷酸、2％草酸、10％三氯乙酸和2％草酸+10％盐酸提取。 3．2 VC含量的测定 在各份提取液中加人淀粉指示剂，用酸式滴定管装人碘标准溶液进行滴定，当溶液变蓝15 S不褪色时即为终点，记录碘液的体积. 4 计算结果 VC含量的计算公式为(176／2)×0．01×V ，将消耗I2标准溶液的体积代人上式，得VC含量。 5 结论 2,4-二硝基苯肼比色法 方法原理： 维生素C总量包括还原型Vc、脱氢型Vc和二酮古乐糖酸，将样品中的还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，进一步水解为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎。其呈色的强度与二酮古乐糖酸浓度成正比，可以比色定量。 17.2.3.2主要试剂 1、10 g·L-1草酸，20 g·L-1草酸； 2、酸处理活性炭：取活性炭200g，加入1∶9HCl 1000mL，煮沸后，抽气过滤，再用沸水1000mL煮沸过滤，重复用水洗至溶液中无Fe2+离子(用10 g·L-1KSCN溶液试验无红色)，放在100~120℃烘干。 3、 20 g·L-1 2,4-二硝基苯肼溶液：称取2,4-二硝基苯肼(分析纯)2.00g溶解于100mL 4.5mol·L-1 H2SO4中。 4、 4.5mol·L-1 H2SO4溶液：量取浓H2SO4(分析纯)250mL，慢慢倒入750mL水中，边加边搅拌。 5、 100 g·L-1硫脲溶液： 用500mL·L-1酒精溶液溶解5.00g硫脲(分析纯)，使其最终体积为50mL。 6、 H2SO4(9∶1)溶液：量取浓硫酸90mL，慢慢倒入10mL水中。 7、标准Vc溶液：称取维生素C(C6H8O5，分析纯) 20mg溶解于10 g·L-1草酸溶液中，移入100mL容量瓶中，并用10 g·L-1草酸溶液定容。吸取此溶液50mL，加入活性炭0.1g，摇1min，过滤。吸取此溶液5mL于100mL容量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀释定容。此Vc工作液为10?g·mL-1。 17.2.3.3操作步骤 1.样品处理：称取适量样品(m)加等重量的20 g·L-1草酸溶液，在组织捣碎机中打成浆状。取浆状物20g用10 g·L-1草酸溶液移入100mL容量瓶中，定容过滤。 2.样品中总Vc的测定：取滤渡10mL，加入10 g·L-1草酸10mL(总Vc约1~10?g·mL-1)，加一勺活性炭。摇1min，静置过滤。 各取滤液2mL于样品管和样品空白管中，各管加入1滴硫脲溶液(HYPERLINK \l 17.2.3.5 注释注1)。于样品管中加入2,4-二硝基苯肼0.5mL，两管都加上盖子，置于37℃保温箱中保温3h。然后取出样品管放入冰水中(终止反应)。样品空白管取出后冷却至室温，然后加入2,4-二硝基苯肼0.5mL。然后在样品管和样品空白管皆置于冰浴中，从滴定管中滴加9∶1硫酸溶液2mL于各管中，边滴边摇试管(防止溶液温度上升，溶液中糖炭化而转黑色)。 将各管从冰浴中取出，在室温下放置30min后(HYPERLINK \l 17.2.3.5 注释注2)，立即在分光光度计540nm波长比色，读取吸收值，根据吸收值从标准曲线查出相应含量。 3.标准曲线的绘制