紫外线C对A549细胞HSPs表达影响.docVIP

紫外线C对A549细胞HSPs表达影响摘要： ［目的］ 研究紫外线C（UVC）对热休克蛋白（heat shock proteins，HSP）27、70及90的影响。 ［方法］ 用紫外线不同照射剂量（0、10、20、40、80 J/m2）来照射A549细胞株，用Western-blot检测HSP27、HSP70、HSP90的表达水平。 ［结果］ 随着UVC剂量的升高，HSP70和HSP27的表达水平先升高，达到一个高峰后又降低。HSP27表达在20 J/m2时达到高峰，HSP70表达在40 J/m2时达到高峰，HSP90各剂量的UVC照射下，未见显著性变化。与对照组（0 J/m2）相比，在10 J/m2时，HSP27和HSP70表达增加（P0.05），HSP70表达仍显著增加，与对照组相比差异有显著性（P0.05），HSP70表达下降，但仍高于对照组（P0.05）。 ［结论］ 随着UVC剂量的升高，HSP70和HSP27的表达水平先升高，达到一个高峰后又降低。HSP27，HSP70能被一定剂量范围的UVC照射所诱导，高剂量UVC照射时HSP27、HSP70的表达被抑制，但HSP90表达未发现能被诱导。 关键词：HSP70；HSP27；HSP90；紫外线C；A549细胞 文章编号:1006-3617(2007)01-0028-04 中图分类号:R114 文献标识码:A 热休克蛋白（heat shock proteins，HSPs）是一组进化上高度保守的蛋白质，在多种应激状态（如高温、缺氧、毒物等）、病理状态（病毒、细菌或寄生虫感染、炎症反应等）或生理刺激（生长因子、细胞分化和激素刺激等）下均可被诱导表达［1］。它能保护细胞、组织和机体免受或少受损伤。根据热应激蛋白分子量大小将HSPs分为如下几个家族：HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSPs（22 000~33 000）及泛素（7 000~8 000）［2］。紫外线是一种存在于生产生活环境中的常见环境应激因素，根据波长可以分为紫外线（ultraviolet，UV）A、B和C不同的波段，其中以“C”波段作用能力最强［3，4］。关于紫外线刺激细胞后的HSPs的表达规律未见报道。 1 材料与方法 1.1 主要仪器和试剂 VD21320型超净台（哈尔滨东联电子公司），CO2培养箱（Thermo Forma 公司），CK40型倒置显微镜（Olympus 公司），低温高速离心机（Sigma公司），电泳槽和垂直电泳仪（Bio-Rad公司），恒温水浴箱（江苏太仓医疗仪器厂）。紫外照射灯UV254 nm（15 W，上海特种荧光灯管厂），紫外辐照计（北京师大光照仪器厂），6孔细胞培养板（Corning公司）。DMEM培养基（GIBCO公司），新生牛血清（GIBCO公司），DC Protein Assay Kit（Bio-Rad公司），丙烯酰胺、亚甲基双丙烯酰胺（上海化学试剂公司，进口分装），十二烷基磺酸钠（SDS）、甘氨酸（华美生物工程有限公司），兔抗人HSP70，HSP27和HSP90（加拿大Laval大学Robert M，Tanguay教授惠赠），小鼠抗人GAPDH（上海康成生物公司），辣根过氧化物酶（HRP）标记羊抗兔IgG（华美生物工程有限公司），HRP标记羊抗鼠IgG（KPL公司），ECL发光试剂盒（Amersham公司）。 1.2 细胞培养及紫外照射 人肺腺癌细胞A549购于武汉大学中国典型培养物保藏中心（CCTCC）。用含10%小牛血清、100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的DMEM培养基，置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养。紫外照射前一天，取对数生长期细胞，按细胞密度为（5~7）×105个/孔接种于6孔培养板，5%小牛血清的DMEM培养基培养过夜。紫外照射前用温D-hank’s液洗细胞2次，吸去液体进行紫外照射。紫外照射处理：调整光源与受照细胞间距离，利用紫外辐照计测定照射强度，使细胞表面所受照射强度为200 μW/cm2，分别用剂量为10、20、40和80 J/m2去照射细胞，相应的照射时间分别为5、10、20和40 s。按照预定UVC剂量处理不同组别的细胞，对照组细胞平行处理时不用紫外灯照射。设3个平行样。照射结束后，加入1 ml培养基放入细胞培养箱继续培养30 min后，用0.25%胰酶消化收获细胞。 1.3 HSP70、HSP27和HSP90的检测 收集恢复培养后的细胞，用冰裂解液［0.1 mol/L NaCl，0.01 mol/L Tris/HCl，pH 7.6，1 mmol/L EDTA，pH 8.0，100 μg/ml苯甲基磺酰氟（PMSF），2 μg/ml亮抑酶