如何做好缺血药物后处理对离体大鼠心肌线粒体功能.docVIP

缺血/药物后处理对离体大鼠心肌线粒体功能 及心磷脂的影响 摘 要 目的：本研究采用Langendorff离体灌注建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，观察缺血后处理(IPostC)和线粒体钾通道开放剂二氮嗪（DZ）KATP通道开放剂在缺血/药物后处理心肌保护中的作用。 方法：采用Langendorff装置建立大鼠离体心肌缺血再灌注模型，将SD大鼠随机分为续灌组（C）（CON）、（DZ）（5-HD+DZ）、IPO）、5-HD拮抗缺血后处理组（5-HD+IPO）8例。C组：在Langendorff灌注平衡20min后续灌70min；CON20min，缺血前灌注4℃ ST.Thomas停跳液，全心缺血40min，复灌30min；DZ20min，全心缺血40min，（50μmol/L）K-H液灌注5min后，然后再用K-H液复灌注25min；5-HD+DZ5-羟葵酸（100μmol/L）K-H液灌注5min，K-H液复灌注20min；IPO20min，缺血前灌注4℃ ST.Thomas停跳液，全心缺血40min，采用恢复灌注10 s、全心停灌10 s，连续6次循环(共计2min) ，然后再用K-H液复灌注28min,；5-HD+IPO（100μmol/L）K-H液5min，再用K-H液复灌注23min。观察：1.平衡末及再灌注末各组不同时间心功能及心肌酶学的变化；2.平衡末及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体，观察线粒体膜电位及氧自由基的变化；3. 平衡末及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体，观察线粒体呼吸功能的变化；4. 平衡末及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体，提取线粒体总磷脂，观察各组线粒体心磷脂含量的变化。 结果: 1. 心功能（HR、CF、LVDP、LVEDP）、心肌酶学（LDH、CK线粒体膜电位Δψ）：各组内再灌注末的心功能、心肌酶学及线粒体膜电位（P0.05或P 0.01）CON组与C组比有极显著差异(P 0.01)；DZ组与IPO组的心功能、、线粒体膜电位CON组(P 0.01)，但不及C组(P0.05或P 0.01)5-HD +DZ组与CON组比无明显差异，而与C组、DZ组及IPO组比有显著性差异(P0.05或P 0.01)5-HD+IPO组CON组及IPO组比均有显著性差异（P0.05或P0.01）。2.线粒体ROS及呼吸功能（3态呼吸RCR、P/OROS及呼吸功能与平衡末比有显著性差异（P0.05P 0.01）；：CONC组比有显著性差异（P0.05或P 0.01）琥珀酸DZ组及IPO的线粒体ROS生成减少及呼吸功能明显优于CON组 (P 0.01)，但不及C组(P 0.05)；5-HD+DZ组与CON组比无明显差异，而与C组、DZ组比有显著性差异(P 0.01)；再灌注末以苹果酸/谷氨酸DZ组与5-HD+DZ组及CON组比没有明显差异，IPO组再灌注末的ROS及呼吸功能与CON组及C组比均有显著性差异（P0.05或P0.01）；5-HD+IPOC组、CON组和IPO组比均有显著性差异（P0.05或P0.01）维生素C/TMP3态呼吸RCR）与5-HD+DZ组及CON组比没有统计学差异，但5-HD+IPO组与C组、CON组和IPO组比均有显著性差异（P0.05或P0.01）3.线粒体心磷脂含量：各组内再灌注末与平衡末比均有极显著差异（P0.01）CON组心磷脂与 C组比有极显著差异（P0.01）；DZIPO组的心磷脂明显高于CON组（P0.01）C组（P0.01）；5-HD+DZC组及DZ组有显著性差异（P0.01, P0.05），CON组没有统计学差异，5-HD+IPO组与C组、CON组和IPO组比均有显著性差异（P0.05或P0.01）。 1. IPostC和DZ能改善缺血再灌注大鼠心脏的心功能、保护线粒体膜电位ROS的产生、保护线粒体呼吸链及心磷脂含量，产生心肌保护作用。2.选择性线粒体ATP敏感性钾通道拮抗剂5-HD能够完全拮抗DZ的心肌保护作用，部分抵消IPostC的心肌保护作用。3. IPostC和DZ通过激活ATP敏感性线粒体钾通道产生心肌保护效应，ATP敏感性线粒体钾通道是产生心肌保护的效应器。4.线粒体ATP敏感性钾通道的开放与保护线粒体膜电位ROS的产生、保护线粒体呼吸链及心磷脂含量，可能是IPostC、DZ后处理产生心肌保护作用的机制之一。 关键词：心磷脂；线粒体功能；二氮嗪；后处理；缺血再灌注损伤；心肌保护 Abstract Objective To investigate the protective effect of isolated rat myocardial mitochondria function and cardiolipin