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胞内抗体及其研究进展
细胞生物学杂志ChineseJournalofCellBiology2006,28:425-428
胞内抗体及其研究进展
洪美亚 曾冬云 龚兴国*
(浙江大学生物大分子与酶工程研究所,杭州 310027)
摘要 胞内杭体是指在细胞内表达并被定位于亚细胞区室的一类新的工程抗体。目前胞内
杭体的研究主要集中于ScFv,ScFv基因结构简单,易导入细胞内表达且便于体外重组操作.胞内
抗体作为一种新的基因治疗工具,在肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗的实验研究及潜在的临床
治疗方面展示了广泛的应用前景。同时,胞内杭体可以用作分析靶蛋白功能的研究工具,是对传
统的 基“因别除”转基因动物的一种有效补充。现从胞内杭体的设计及载体选择、肿瘤基因治疗、
人艾滋病基因治疗等方面对胞内杭体的研究进展进行综述。
关键词 胞内抗体;基因治疗;HIV-1;ScFv
随着抗体工程技术的发展以及对细胞内蛋白质 针对不同的实验目的,对ScFv蛋白的N端或
运输信号的深入了解,派生出了一项全新的可阻断 C端进行一些修饰,就可将ScFv人为地滞留于各个
细胞内重要靶蛋白的胞内抗体技术。胞内抗体 亚细胞区室中。将来源于SV40大T抗原的核定位
(intracellularantibody,intrabody)是指在非淋巴细胞 信号(NLS)或TAT核仁前导序列信号同C末端连接,
内表达并被定位于亚细胞区室(如细胞核、细胞浆 可以制成核滞留型或核仁滞留型胞内抗体。在N端
或某些细胞器),特异性干扰或阻断靶分子的活性 融合一段导肤或在C端引入一段内质网滞留信号
或加工、分泌过程,从而发挥其生物学功能的一类 (KDEL),可使ScFv滞留于内质网,这在实际研究
新的工程抗体。它是靶向细胞内抗原,具有特异性 中比较常见。这是因为内质网是多种生物活性蛋白
高、亲和力强的结合特性,并能在特定的亚细胞中 加工、分泌的通路,将抗体滞留于内质网管腔或内
稳定表达的免疫球蛋白。胞内抗体已成为功能基因 膜上,大大增加了抗体与靶蛋白相互作用的机会。
组学、蛋白质组学及基因治疗领域中广泛应用的实 细胞内表达单链抗体的载体包括:逆转录病毒
验工具 。 载体、腺病毒载体及腺病毒相关病毒载体、单纯疤
疹病毒载体和脂质体载体[1J。其中腺病毒载体可携
I胞内抗体的设计及载体选择 带Fab基因转导入淋巴细胞,使治疗基因导入复制
胞内抗体主要以ScFv.Fab两种形式存在。ScFv 和非复制细胞,且消除了鼠源性逆转录病毒基因转
抗体分子结构简单,由抗体的重链可变区与轻链可 化中潜在激活HIV-1的问题。通过改变载体调控结
变区通过一短肤(GGGGS3)连接而成,它基本保持 构、改进载体的包装技术,可提高转化效率,并
了亲本抗体对抗原的亲和力。可变区基因不仅可通 使ScFv在宿主细胞内高效表达。
过提取某一特异性杂交瘤细胞rnRNA后用RT-PCR
获得,而且噬菌体抗体库技术为其获取提供了丰富 2胞内抗体与肿瘤基因治疗
的源泉。由于ScFv基因结构简单,便于体外重组 经重组DNA技术及真核表达载体的构建,可
操作,当前己成为胞内抗体技术最常采用的抗体形 使胞内抗体在肿瘤细胞特定的亚细胞器中表达并且
式。Fab包括重链的VHCH1(Fd段)和完整轻链,两 靶向抗原底物。目前研究较多的主要靶蛋白包括:
者通过一个链间二硫键连接,是完整抗体的三分之 表皮生长因子受体超家族((EGFR,ErbB-2,ErbB-3.
一。Fab具有与抗体相同的抗原结合特性,但是其 ErbB-4)、白细胞介素2受体(IL-2R).Ras蛋白、叶
重链和轻链必须在内核糖体入口位置同时表达才有 收稿日期:2005-09-19 接受日期:2006-01-13
实际应用价值。 *通讯作者。Tel:0571E-mail:gongxg@
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