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柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA在乳酸乳球菌中的克隆与表达 张雪莉1，荣泽秦2，金崔尚3，何 庆2，刘 尚 2 北京市农林科学院 畜牧兽医研究所，北京 100089；2.中国农业大学 动物医学院，北京 100094； 3.中国农业科学院 哈尔滨兽医研究所，黑龙江 哈尔滨 150001) 摘要：用PCR技术特异扩增了柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA序列，克隆至质粒pMD18-T中，获得重组质粒pMD18-T-TA4，采用Kpn I/Sa cI双酶切法及PCR确认正确后，将TA4基因cDNA目的片段亚克隆到乳酸乳球菌表达载体pMG36n中，电穿孔法转化乳酸乳球菌LM0230，获得重组质粒pMG36n-TA4，采用Kpn I/Sac I双酶切法及DNA测序证明cDNA序列完全正确。 获得TA4乳酸乳球菌表达株，经SDS电泳分析，结果表明表达产物与预期大小的TA4蛋白分子量一致。 关键词：柔嫩艾美耳球虫；TA4抗原基因cDNA；乳酸乳球菌；克隆与表达 Cloning and expression of TA4 antigen from Eimeria tenella in Lactococcus lactis ZHANG Li1, QIN Ze-rong2, CUI Shang-jin3, HE Zhao-qing2, LIU Shang-gao2 Beijing Municipal Academy of Agriculture Forestry, Beijing 100089, China; 2. China Agricultural University, Beijing 100094, China; 3. Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 100051, China) Abstract: TA4 antigen cDNA of E.tenella was amplified by PCR and cloned into a vector pMD18-T. The positive plasmid contained TA4 antigen cDNA was determinded by restriction enzyme analysis and PCR. The plasmid pMD18-T-TA4 and the vector pMG36n were both digested by Sac I and Kpn I. The cDNA encoding TA4 antigen was subcloned into pMG36n and transferred into Lactococcus lactisLM0230 by electroporation. It proved that the positive recombinant plasmid pMG36n-TA4 contained cDNA encoding TA4 antigen by restriction enzyme analysis and sequence determination. In the positive transformants, the TA4 antigen was expressed as a fusion protein in Lactococcus lactis LM0230, which was verified by SDS. Key words: Eimeria tenella ; TA4 Antigen; Lactococcus lactis; cloning and expression 球虫子孢子表面的一种抗原TA4为25 Ku的糖蛋白，是由8 Ku和17 Ku两条多肽通过二硫键连接而成的。在孢子化开始后16ｈ～24ｈ合成[1]。Files[2]等利用一段标记的寡聚核苷酸序列作探针，首先从基因文库中筛选出了TA4抗原的基因（ta4），其后Brothers[3]利用ta4基因片段克隆出了该基因的全长cDNA，并将此在大肠杆菌中直接表达或作为β-半乳糖苷酶基因融合蛋白的一部分表达。近年来乳酸菌分子生物学进展迅速，探索一些有价值的基因在乳酸菌中克隆和表达已成为乳酸菌分子遗传学研究的热点[4~6]。因此，乳酸菌基因工程菌在功能食品、医疗保健及微生态制剂、人工口服疫苗等领域的应用均具有诱人的前景[5]。本研究主要采用分子克隆技术，进行TA4抗原cDNA在乳球菌中克隆和表达的基础性工作，构建TA4抗原的cDNA重组表达质粒，并用电穿孔法导入乳球菌中，筛选到能表达