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流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在酵母菌中的
生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, August 25; 26(8): 1068−1073
Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@ ©2010 CJB, All rights reserved.
动物及兽医生物技术
流感病毒H1N1 血凝素基因和神经氨酸酶基因在酵母菌
中的表达
1 1 1 1 2 3 2 1
张烨 ，于在江 ，辛丽 ，陈永坤 ，唐启慧 ，陈禹保 ，陈清轩 ，舒跃龙
1 中国疾病预防控制中心病毒病所 国家流感中心，北京 100052
2 北京标凯科技有限公司，北京 100094
3 北京中亚国瑞生物经济研究所，北京 102206
摘 要: 在成功克隆流感病毒H1N1 全长HA(Hemagglulinin ，HA) 、NA(Neuramidinase ，NA) 基因并测序的基础上，将部
分基因序列克隆到表达载体pMETA 上，构建了重组表达质粒pMETA/HA(52~1 557 bp) 、pMETA/NA(121~1 263 bp) ，电
转化真核酵母菌pMAD16 ，甲醇诱导表达，利用Ni2+ 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，并用Western blotting 和ELISA
方法检测其抗原性。SDS显示重组蛋白在酵母菌中可以高效表达，蛋白纯度占总蛋白的 95 ％以上，ELISA 和
Western blotting 实验证实，重组蛋白具有良好的抗原性。成功克隆和表达了流感病毒H1N1 HA 、NA 基因序列，为流
感病毒H1N1 诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了参考。
关键词: 流感病毒 H1N1 ，血凝素，神经氨酸酶，酵母表达
Expression of the hemagglutinin and neuramidinase gene of
influenza A virus H1N1 in Pichia methanolica
1 1 1 1 2 3 2
Ye Zhang , Zaijiang Yu , Li Xin , Yongkun Chen , Qihui Tang , Yubao Chen , Qingxuan Chen ,
and Yuelong Shu1
1 Department of Influertza , Nattonat Institute of Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing
100052, China
2 Beijing Biokit Science and Technology Limited Company, Beijing 100094, China
3 Sinogreen Institute for Bioeconomy, Beijing 102206, China
Abstract: On the basis of successful cloning the full length hemagglulinin (HA) and neuramidinase (NA) gene and sequence
analysis of influenza virus H1N1, part of the gene was ligated into pMETA. Exp
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