不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶突变体的构建.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, June 25; 27(6): 860−867 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2011 CJB, All rights reserved. 工业生物技术 不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶突变体的构建 1 1 1 1 1 1 1 1,2 1 陈的 ，舒正玉 ，薛龙吟 ，林瑞凤 ，吴继光 ，蒋咏梅 ，李欣 ，林跃鑫 ，黄建忠 1 福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心 福建省现代发酵技术工程研究中心 福建师范大学生命科学学院，福州 350108 2 宁德师范学院，宁德 352100 摘 要: 为获得不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶 (ANL) 突变体，在生物信息学分析基础上，对黑曲霉脂肪酶盖子 结构域两侧铰链区的氨基酸残基进行了置换突变，获得两个黑曲霉脂肪酶突变体 (ANL-Ser84Gly 和ANL-Asp99Pro) 。 对不同浓度对硝基苯丁酸酯的水解活性检测结果表明：ANL-Ser84Gly 的催化活性仍依赖油水界面，而 ANL-Asp99Pro 的催化活性不再依赖油水界面。底物特异性检测结果表明：较 ANL 而言，ANL-Ser84Gly 的比活力显著降低，其水解 对硝基苯棕榈酸酯、对硝基苯豆蔻酸酯、对硝基苯月桂酸酯和对硝基苯癸酸酯的比活力分别降低了 29.8 ％，53.1 ％， 60.1 ％和77.1 ％；而ANL-Asp99Pro 水解对硝基苯棕榈酸酯的比活力提高了2.2 倍。铰链区的突变破坏了突变体蛋白质 分子ANL-S84G 与ANL-D99P 的二级结构作用力，使突变体分子的二级结构域更趋不稳定，从而导致了突变体分子的 热稳定性显著降低。不依赖油水界面激活的脂肪酶突变体的构建，将有利于深入了解脂肪酶界面激活的分子机制。 关键词: 黑曲霉，脂肪酶，盖子结构域，界面活性，重叠延伸聚合酶链式反应 Construction of Aspergillus niger lipase mutants with oil-water interface independence 1 1 1 1 1 1 1 De Chen , Zhengyu Shu , Longyin Xue , Ruifeng Lin , Jiguang Wu , Yongmei Jiang , Xin Li , Yuexin Lin1,2, and Jianzhong Huang1 1 Engineering Research Center of Industrial Microbiology, Ministry of Education, Engineering Research Center of Fujian Modern Fermentation Technology, College of Life Sciences, Fujian Normal University, Fuzhou 350108, China 2 Ningde Normal University, Ningde 352100, China Abstract: Based on previous bioinformational analysis results, two Aspergillus niger lipase (ANL) mutants, ANL-Ser84Gly and ANL-Asp99Pro were constructed to screen ANL mutant