pH响应的包覆超顺磁性纳米颗粒的γ-聚谷氨酸二级-中国科学技术协会.docVIP

pH响应的包覆超顺磁性纳米颗粒的γ-聚谷氨酸二级结构研究 张菊花1, 2，邢建民1*，江洋洋1, 2，高红帅1, 2，刘会洲1 1. 中国科学院过程工程研究所，中国科学院绿色过程与工程重点实验室，北京100190 2. 中国科学院研究生院，北京100049 摘 要 用傅里叶红外光谱法(FTIR)定量研究了pH对包覆超顺磁性纳米颗粒的γ-聚谷氨酸(γ-PGA)二级结构变化的影响。结合傅里叶去卷积技术和二阶导数法对原始谱带(酰胺Ⅰ带)进行高斯拟合，计算了二级结构的相对百分含量。红外结果显示：pH变化影响γ-PGA的二级结构。γ-聚谷氨酸磁性纳米微球中γ-PGA的β-折叠和β-转角的总含量很大，达65％以上，而α-螺旋和无规卷曲的含量则比较少。随着pH值的增大，β-折叠的含量逐渐减少相反β-转角的含量逐渐增大。γ-PGA二级结构变化与γ-聚谷氨酸磁性纳米微球在水溶液的稳定性有关。考察了γ-聚谷氨酸纳米微球的zeta电位随pH的变化。结果表明，pH为10.2时zeta电位出现极小值，其绝对值最大，颗粒稳定性最好。 关键词 傅里叶红外光谱法；γ-聚谷氨酸；磁性纳米微球；pH；zeta电位 中图分类号：O657.3 文献标识码：A DOI：10.3964/j.issn.1000-0593(2009)08-2148-04 引言 红外光谱法是最早用于研究多肽和蛋白质二级结构的手段之一［1, 2］，它具有准确及实用性强等特点。 γ-聚谷氨酸(polyglutamic acid，γ-PGA)是由谷氨酸经肽键结合形成的生物可降解大分子多肽，能被机体吸收，代谢和排泄，不易产生积蓄和毒副作用，是理想的药用载体材料。了解γ-PGA二级结构的信息，对研究药物负载和释放有重要的意义［3, 4］。γ-PGA二级结构对pH非常敏感。据研究报道，γ-PGA的二级结构与侧链羧基的电离度有关，未电离的侧链羧基对二级结构的分子内氢键有稳定作用，当羧基电离时会破坏其氢键稳定从而发生结构转变［5, 6］。所以，改变pH值可以调控γ-PGA的二级结构。γ-PGA包覆超顺磁性纳米颗粒可得到γ-PGA磁性纳米微球。这种新型的生物材料在生物医药和生物医学工程领域中具有广泛的应用前景。近年来，聚合物固体颗粒在溶液中的结构变化以及稳定性研究成为热点之一［7-9］。 本文主要研究目的是，结合傅里叶去卷积技术、 二阶导数法以及高斯曲线拟合［10］定量研究在不同pH值溶液里经冷冻干燥得到的固体γ-聚谷氨酸以及γ-聚谷氨酸磁性纳米微球二级结构的信息，并分析二级结构变化对磁性微球在水溶液中分散稳定性的影响。 1实验部分 1.1材料 氯化亚铁(FeCl2·4H2O)，三氯化铁(FeCl3·6H2O)，北京化学试剂公司，分析纯；聚已二醇(PEG Mw 400)，北京化学试剂公司，分析纯；γ-聚谷氨酸(γ-PGA)，珠海优茂生物科技有限公司，纯度90％，Mw 50 000～80 000。 1.2γ-聚谷氨酸磁性纳米微球制备 用化学共沉淀法［11］制备超顺磁性Fe3O4颗粒，Fe3＋与Fe2＋摩尔比为2∶1。在制备过程中加入PEG得到了Fe3O4磁流体。将0.5 g磁流体超声分散在γ-PGA溶液里(1.5 g γ-PGA 溶于100 mL去离子水)在氮气保护下升温至80 ℃， pH值调至3(1 mol·L－1 HCl溶液)，搅拌4 h合成了γ-PGA包覆的磁性纳米微球 (粒径在200～300 nm 之间)。 1.3样品制备 配置0.5 mg·mL－1，pH值分别为2，7，10，13的γ-PGA溶液和γ-PGA磁性纳米微球分散液。pH值用0.5 mol·L－1磷酸溶液，0.5 mol·L－1氢氧化钠溶液，0.5 mol·L－1磷酸氢二钠溶液进行调节。配好的样品放置2 h，再置于冰箱冷冻2 h。然后，放入冷冻干燥机(Vir Tis，SP公司)，在－60 ℃冷冻干燥24 h。 1.4傅里叶变换红外光谱及数据处理 干燥好的样品用KBr压片，在Bruker公司生产的VECTOR 22傅里叶变换红外光谱仪上进行检测，扫描次数256次，分辨率为2 cm-1。根据文献［12, 13］所用的图谱处理方法可以得到二阶导数谱和去卷积谱。用Microsoft Origin数学软件对原始谱带进行高斯曲线拟合，得到子峰数目10～12之间，R2大于0.999。 2结果与分析 2.1pH对γ-聚谷氨酸二级结构的影响 图1是不同pH条件下的γ-PGA溶液经过冷冻干燥以后测得的红外吸收。从图1(a)中可以看出，1 714 cm-1 是γ-COOH的CO伸缩振动吸收峰。1 650 cm-1属于酰胺Ⅰ带为α-螺旋［14-16］，1 556 cm-1是α-螺旋酰胺Ⅱ带吸收［14］。当pH为7时，1 650和1 556 cm-