蚯蚓洗涤液防治月季灰霉病初步机理探究.docVIP

蚯蚓洗涤液防治月季灰霉病初步机理探究引言 月季是蔷薇科蔷薇属多年生木本植物，是著名的四大切花之一，近年来已经成为花卉主栽品种。但是近年来，月季灰霉病已成为1种世界性的严重病害，在全国各地均有发生。危害月季的叶与花，严重影响了其产量和品质，给农业生产造成巨大的损失。目前采用的化学防治方法易产生抗药性、残留和环境污染等问题，探讨灰霉病的生物防治方法已迫在眉睫。 蚯蚓洗涤液来自蚯蚓的真体腔和背孔分泌的大量液体，是其他常见蚯蚓制品的副产品。我们采用平板滤纸片扩散法并结合大田实验，探究蚯蚓洗涤液对月季灰霉病的防治效果。该项目是在前期研究的基础上开展的第2期研究，寻找对灰霉菌起抑制作用的物质基础，初步探讨蚯蚓洗涤液防治植物灰霉病的机理。 实验材料与方法 3实验材料 供试土壤：北京一零一中学生态园内土壤(土壤有机质、氮、磷、钾的平均含量为：1.04％、0.08％、0.11％、2.37％、pH值7.08±0.04)。 供试菌种：灰霉病菌(农科院植物保护所提供)。 供试蚯蚓品种：赤子爱胜蚓(北京一零一中学生态园內饲养)。 供试培养基：PDA培养基。 供试作物：培养3年的月季幼苗。 叶绿素测量仪：SPAD-502、冷冻机、超净工作台、天平、自制筛筒等。 实验方法 伞蚯蚓洗涤液抑菌性的测定实验 蚯蚓洗涤液的制备：取蚯蚓100g干40目纱布筛中，置于容器上，用1000mL无菌水反复冲洗10次，所收集的液体即为蚯蚓洗涤液，于40℃冷藏备用。 滤纸片扩散法：制备真菌培养基平板，将经37℃过夜培养的灰霉菌，经显微镜计数后，稀释成10℃FU/mL，将直径1cm的滤纸片在10℃FU/mL灰霉菌液中浸泡5min，用无菌镊子取出，平铺在平板中心处，每皿4个滤纸片，其中3个处理，分别浸泡蚯蚓洗涤液原液(CT)、10“稀释液(CT、)和10-2稀释液(CL)，同时以无菌水浸泡的滤纸片作为对照。这4个滤纸片部分别在皿的四周，与中心滤纸片等距1.5cm，30℃倒置培养，定期观察抑菌圈的形成情况，测量抑菌圈的大小并拍照，该实验进行6个重复。 伞蚯蚓洗涤液抑制灰霉菌的大田实验 在学校生态园实验田筑4个哇，畦长9米、宽1米，全部种植月季，每畦种植2行，每哇30株。其中3畦为实验组、1畦为对照组。对于3哇实验组分别喷施等量的蚯蚓洗涤液CT、CTl、CT，对照组喷施等量的清水。喷施在生长期进行，从植株长出第1片真叶开始，每3天喷施1次，喷施在早晨8:OO前或下午4:00后进行。共喷施约21次。 当月季生长4周后(花期过后)，选取实验组和对照组每哇3株，每株从顶部选取第4片叶，各畦10片叶，接种灰霉菌孢子悬液，3天后观察记录感染情况，叶片感染病斑的面积测定采用纸重比测定法。同时，注意观察记录花蕾数、花朵数、花朵大小、花辦多少及花期，观察记录时随机取样，每畦3株，计算出乎均值。 伞叶片感染病斑面积纸重比测定法 取透明的A4宣纸称重，并测其面积，后将此纸依次连续4次1/2对折，每次对折都裁开，依次称重，测其面积。以纵坐标为重量，横坐标为面积，作标准曲线，将叶片感染的不规则面积用透明宣纸按其大小描绘下来剪下，称其重量，在标准曲线上找其面积，该面积就是叶片感染的面积。 伞月季生长情况测定 在月季生长期，对其生长情况花蕾、花朵、花辦及花期进行测量记录。 伞蚯蚓洗涤液成分的透析 将透析袋清理干净，用夹子把透析袋一端夹好，从另一端注入去离子水，检验是否漏水。检漏后，将蚯蚓洗涤液各30mL分别加入3个透析袋中，确保透析袋內无任何气泡后，将一端用夹子夹好，将透析袋置于去离子水杯中(去离子水没过透析袋)12～24h，然后将去离子水杯放入冰盒中，并放置在磁力搅拌器上。之后，将去离子水杯置于冷冻机內冷冻抽提，将抽提出的干物质(即袋外的)分别加20mL无菌水予以溶解后待用。 伞蚯蚓洗涤液透析袋內、外物质抑菌性实验 取出透析袋內的溶液，同时和用上述抽提的干物质制成的溶液，进行抑菌实验。 结果与分析 蚯蚓洗涤液抑菌性实验的测定结果 由滤纸片扩散法测定的蚯蚓洗涤液抑菌实验测定结果表明，培养24小时后，灰霉菌菌落距对照组边缘有0.4cm，48小时后距对照组边缘只有0.05cm，72小时后，距离为0，灰霉菌菌落己扩散到对照组。对照组没有任何抑菌性能。蚯蚓洗涤液原液CT，其边缘距灰霉菌菌落的距离，从24小时到72小时都保持在0.6cm，远远大干CT、和CT距灰霉菌菌落的距离。由此可见，蚯蚓洗涤液原液CT抑菌性能CTCT 蚯蚓洗涤液抑制灰霉菌的大田实验结果 当月季生长4周后，花期过后，选取实验组、对照组各10片叶随机取样，接种灰霉菌孢子悬液，3天后观察感染情况(图1)，用纸重比法测量其感染面积，结果表明，