基于DPO引物多重PCR技术的应用检测5种流感病毒文献引物的设计.PPT

多重核酸检测技术——基于DPO引物多重PCR技术的应用研究 Dual Priming Oligonucleotide System （DPO,双启动寡聚核苷酸引物系统） 胡孔新 中国检验检疫科学研究院 卫生检疫研究所 1. 一次性检测多个靶基因、效率高；2.降低实验室成本，节省时间；3.加快检测实验进程。 多重PCR核酸检测体系的优点 要求在同一反应体系中进行多目标特异性扩增，涉及因素复杂，较单一PCR扩增体系，研制过程困难得多：1.不同引物内、引物间的碱基配对干扰；2. 必须考虑引物非特异性结合可能，引物设计长、短要权衡；3.产物片段长度要在电泳检测时可以区分；4.反应体系涉及dNTP浓度、反应体积、变性退火温度、循环次数等因素；5.不同引物扩增效率间的平衡；6.扩增目标越多，条件摸索困难越高。 多重PCR检测体系研制的难点 DPO引物-双启动寡聚核苷酸引物系统 DPO引物的结构 DPO引物由三个部分组成：5’端部分(18-25nt)、3’端部分(6-12nt)以及连接两端的多聚次黄嘌呤(3-8个)。 稳定端 检测端 链接段 多重DPO引物技术背景 DPO引物的优势 1 降低了引物的非特异性扩增 简化了多重PCR体系的优化过程 与普通多重PCR相比，有较高的敏感性 DPO引物技术用于多重PCR设计优势 DPO引物的优点是由其不对称的碱基分