枯草芽胞杆菌基因组混组方法.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, October 25; 26(10): 1385−1392 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn ©2010 CJB, All rights reserved. 细胞工厂的构建技术 枯草芽胞杆菌基因组混组方法 1,2 3 1 1 1,3 4 1 1,2,3 杨俊杰 ，范文超 ，肖晗 ，关春鸿 ，曹传增 ，邵海峰 ，姜卫红 ，杨晟 1 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 合成生物学重点实验室，上海 200032 2 上海工业生物技术研发中心，上海 201201 3 中国科学院上海生命科学研究院湖州工业生物技术中心，湖州 313000 4 浙江顺风海德尔有限公司，东阳 322100 摘 要: 基因组混组作为一种育种方法，通过循环原生质体融合等手段，使得不同菌株来源的基因组能够得到充分重 组，增加将正向突变整合到同一重组子中的机会。使用 4 株带有 4 种不同标记的枯草芽胞杆菌亲本为初始菌株，通过 循环转化、循环转导或循环原生质体融合的手段进行基因组混组，统计后代中非亲本类型占整个群体的比例，以衡量 基因组混组的效果。分别经过 5 轮循环原生质体融合、循环转化或者循环转导，结果显示，重组程度较高者在后代群 −4 −4 −3 体中的比例较低，带有4 种标记的后代未出现，带有3 种标记的后代最高分别为4.53×10 、1.64×10 、4.47×10 ，明 显低于文献报道的天蓝色链霉菌中同样实验的结果：带4 种和3 种标记的后代分别占2.5 ％、17 ％。对比上述实验的结 果和文献报道的天蓝色链霉菌、乳杆菌基因组混组的结果，并结合计算机模拟循环融合过程，分析后认为:要达到较充 分的基因组混组，需要有能够实现微生物细胞间高频重组的操作技术作为基础，重组频率应该不低于 10−3~10−2 数量级。 关键词: 基因组混组，枯草芽胞杆菌，分子育种，原生质体融合，转化，转导，计算机模拟 Genome shuffling method of Bacillus subtilis 1,2 3 1 1 1,3 4 Junjie Yang , Wenchao Fan , Han Xiao , Chunhong Guan , Chuanzeng Cao , Haifeng Shao , Weihong Jiang1, and Sheng Yang1,2,3 1 Key Laboratory of Synthetic Biology, Institute of Plant Physiology and Ecology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200032, China 2 Shanghai Research and Development Center of Industrial B