鲜味八肽的表达载体构建及表达效果验证.pdfVIP

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2017，Vo1．33，No．2 鲜味八肽的表达载体构建及表达效果验证 张鲞，卢洲，熊伟，苟兴华，郭思亚，边杨 (成都大学肉类加工四川省重点实验室，四川成都 610106) 摘要：鲜味肽是近年来新发现的呈味物质，但国内外对其呈味效果存在争议。导致这一争议的可能原因是验证鲜味肽呈味效果 的方法主要是采用化学合成法。为了制备生物源鲜味肽，以便对鲜味肽呈味效果进行再评价，本文以争议性鲜味八肽为 目标肽，采用 基 因工程法 ，构建 了制备生物源鲜味肽的表达载体 ，并对其表达效果进行 了验证 。根据争议性鲜味八肽的一级结构 Lys—Gly．Asp．Glu．Glu．Se~Leu—Ala和大肠杆菌E．coliBL21(DE3)的密码子偏爱陛，设计了该鲜味八肽的DNA序列，并将其克隆在 pET-32a(+)上形成表达载体。通过菌落 PCR检测阳性克隆、重组质粒鉴定及工程菌的诱导表达，结果发现，鲜哧八肽的目的基因成 功重组在pET-32a载体上，所得pET-32a鲜味肽重组载体转化大肠杆菌后能够正常表达融合蛋白。这为后续获得生物源鲜味八肽奠定 了基础。 关键词：鲜味肽；大肠杆菌；工程 载体 文章篇号：1673—9078(2017)2—89-93 DOI：10．13982~．mfst．1673—9078．2017．2．014 ConstructionandValidationofanExpressionVectorforUmami Octapeptide ZHANG in，LU Zhou，XIONGWei,GoUXing—hua，GUO Si-ya，BIAN Yang (SichuanProvincialKeyLaboratoryofmeatprocessing，ChengduUniversity,Chengdu610106，China) Abstract：Umamipeptideisarecentlyidentifiedumamisubstance，butitstasteiscontroversialdomesticallyandinternationally．The possiblereasonforthecontroversyisthatthemehtodofverifyingitstasteismainlybasedonchemicalsynthesis．Inordertoobatinnatural urnamipeptideofrthefurth~revaluationofhteumamipeptideatste，hteconrtoversialumamiocatpeptidewasusedasthetargetpeptide，gene engineeringwasadoptedtoconstructallexpressionvectorofrtheoctapeptide,anditsexpressioneffectwasverified．Th eDNA sequenceofhte ocatpeptidewasdesignedaccordnigtohteprimary structureoftheoctapeptide，Lys—Gly-Asp-Glu-Glu—Ser-Leu-Ala,and codonbiasof EscherichiacoliBL21(DE3)，nadwasclonedintopET-32a(+)toofrmhteexpressionvector．Throughcolonypolymerasechainreaction(PCR) identificationofpositiveclones，identificationoftherecombinantplasmid，nadhteinducedexpressionofhteengineeredbacteria,itwasfound htatthetargetgneeoftheocatpeptidewassuccessfullyrestructuredintohtepET-32avect