禽源空肠弯曲杆菌的分离与双重PCR鉴定.PDF

2013年第 ll期 (总第202 研究 。：^ ‘·。’‘^ 。。·’。。·’·。·．‘．_’。‘’^’。’·’。’’‘’‘。’^ -‘ ， 试验研究 ； i ；： ‘ 。 。 。 。 ‘ ‘ 。 ’ ’ ’ ‘ ‘ ‘ ‘ ． ． · · · - · · · · ． ． ． ． ·’·．．．·。·‘··‘·。·‘·-‘‘·‘·‘，’．． 禽源空肠弯曲杆菌的分离与双重PCR鉴定 翟海华①② 王 娟② 常维山① 王君玮② (①山东农业大学动物科技学院 泰安 271000 ②中国动物卫生与流行病学中心 青岛) ‘ 摘要 以空肠弯曲杆菌保守基I~mapA和hipO基因为靶基因，建立空肠弯曲茵的双重PCR方法，该方法只对空肠弯 曲菌有特异性，对大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌等则不能扩增出特异性片段．利用该方法对从市场 养殖鸡和屠宰场的 禽源空肠弯曲菌进行了分离和鉴定，平均分离率为35．8％，PCR鉴定结果与生化鉴定结果相一致，说明建立的双重PCR鉴 定方法具有灵敏、特异的特点，可节省传统生化鉴定所耗费的时间，为空肠弯曲茵的检测提供新方法。 关键词 空肠弯曲茵 分离 双重PCR 中图分类号：s852．61+2 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2013)11．0001．03 食源性致病菌作为一个公共卫生问题是影响食品卫 伦比亚血琼脂基]~ll(OXOID公司)。 生安全的主要因素之一，而空肠弯曲杆菌(Campylobacter 1．2 主要试剂及器材 新鲜绵羊 (青岛海博生物科技公 jcjuni)就是食品卫生中一种非常重要的食源性致病菌。它 司)，2xTaqPCRMasterMix(Promega公司)，DNAmarker 是引起人类细菌性腹泻的最重要原因之一，在很多动物 DL2000(TaKaRa宝生物 (大连)有 限公司)，厌氧培养盒和 特别是禽类体 内属于正常携带细菌，如果屠宰过程中不 微需氧产气袋(日本三菱公司)。 注意卫生操作，或者加工不完全，便能够通过食物链传 l-3 样品来源 青岛市市场上出售活鸡的泄殖腔棉拭 递给人类。可 以引起人类发热、急性 胃肠炎，儿童易发 子，巾国动物卫生与流行病学II1心门诊实验室养殖鸡的 病 ，免疫低下者会进一步导致心内膜炎、关节炎、骨髓 泄殖腔棉拭予，青岛市某禽屠宰场鸡盲肠。 炎、脑炎、败血症等全身性疾病，最严重的并发症是某 1．4 试验菌株 空肠弯曲市I：菌标准铕株ATCC33560，大 些血清型的Cj．ejuni感染会引起周围神经 自身免疫性疾病- 肠埃希茼ATCC25922，金黄色葡萄球菌标准茼株ATCC 格林巴利综合症(GuillainBarr~syndrome，GBS)。空肠弯 29213。阪崎肠杆菌标准菌株ATCC51329，鼠伤寒沙门氏 曲杆菌属于弯 曲杆菌属，是革兰氏染色阴性菌：具有多 菌标准菌株CMCC (B)50115由中国动物卫生与流行病 形性，呈弧形、螺旋形、海鸥展翅形或S形：无芽胞；一 学中心实验室提供。 段或两端有一根鞭毛 ，呈螺旋性滚动，陈旧培养基 中菌 2 方法 形变球状 ，丧失动力；为微需氧菌 。在大气或厌氧的环 2．1 培养基制备 Cary．Blair~运送培养基：称取