细胞DNA损伤彗星完全荧光检测试剂盒产品说明书（中文版.PDFVIP

细胞 DNA 损伤彗星完全荧光检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 细胞 DNA 损伤彗星（Comet ）完全荧光检测试剂是一种旨在采用动物细胞碱性凝胶电泳，在电 场环境下，损伤变性的 DNA 片段迁移形成特定的形态，即 DNA 移动尾巴，来进行体外评价和半定量分析 DNA 损伤程度的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于新 鲜动物细胞的 DNA 损伤研究，包括 DNA 链断裂、氧化性碱基损伤、DNA 剪切损伤、DNA 交联、DNA 修 复等，应用于环境和药物毒理学、放射学、氧化应急反应等研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定， 操作简便，重复一致。 技术背景 彗星检测技术（Comet assay ），又称为单细胞凝胶电泳检测技术（single cell gel electrophoresis assay；SCGE ） 或微凝胶电泳检测技术（microgel electrophoresis assay ），是基于变性切离的DNA片段，在电场的影响下， 从细胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在细胞核内。通过凝胶电泳，呈现出分子迁移图形， 形成彗星拖尾（comet tail ）现象，即完整DNA 的细胞染色体为“头”，而松散和断裂的DNA为“尾”，以 此评价DNA损伤程度。这是分析单一细胞DNA链断裂的敏感方法之一。其技术方法的基本步骤是：第一， 细胞固定包埋在凝胶里；第二，细胞裂解处理；第三，DNA变性处理；第四，电泳迁移；第五，染色和图 像分析。由此观察DNA迁移形态，进行体外检测，成为细胞DNA损伤研究的基本手段。 产品内容 胶体液（Reagent A ） 毫升 基质液（Reagent B ） 毫升 清理液（Reagent C ） 毫升 裂解液（Reagent D ） 毫升 电泳液（Reagent E ） 毫升 中和液（Reagent F ） 毫升 染色液（Reagent G ） 毫升 产品说明书 1 份 保存方式 保存染色液（Reagent G ）在－20 ℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月 用户自备 无离子水：用于稀释电泳缓冲液和清洗 磨砂载玻片和盖玻片：用于放置样品进行微凝胶电泳的器材 微型台式离心机：用于细胞处理 1 电泳槽：用于微凝胶电泳的装置 恒温培养箱或恒温水槽：用于孵育反应 1.5毫升离心管：用于细胞操作或混匀基质液的容器 90 mm培养皿：用于样品处理、染色等的容器 荧光显微镜：用于观察细胞彗星现象 实验步骤 一、 琼脂载玻片准备 1． 准备1张磨砂载玻片，磨砂面朝上 2． 将 胶体液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出） 3． 放进40℃恒温水槽孵育10分钟 4． 移出xx微升 到载玻片中间 胶体液（Reagent A） 5． 盖上洁净的盖玻片 6． 轻压盖玻片5 分钟 7． 放进4℃冰箱里备用 二、 细胞准备 实验开始前，将 置于微波炉里加热溶化，然后放进40℃恒温水槽备用。然后 基质液（Reagent B） 进行下列操作。 1． 准备6孔细胞培养板1孔待测的新鲜培养细胞 （1 X 105细胞） 2． 使用细胞刮脱离细胞 3． 转移到1.5毫升离心管（注意：悬浮细胞可以由此开始） 4．