基因改造Rhodobactersphaeroides提高.PDF

微生物学通报 Apr. 20, 2013, 40(4): 593−602 Microbiology China © 2013 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 基因改造Rhodobacter sphaeroides 提高 辅酶Q10 的产量 * 李力 林丹枫 黄建忠 (1. 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心 福建 福州 350108) (2. 福建师范大学 生命科学学院 福建 福州 350108) (3. 福建省现代发酵技术工程研究中心 福建 福州 350108) 摘 要: 【目的】通过敲除类球红细菌2.4.1 基因组中八氢番茄素合成酶基因 crtB, 让异 戊二烯前体更多流向辅酶 Q10 的合成。引入大肠杆菌编码的分支酸裂解酶基因 ubiC 和 4-羟苯甲酸转移酶基因 ubiA, 提高 4-羟苯甲酸的合成和与聚异戊二烯的连接, 从而提高 类球红细菌的辅酶 Q10 产量。【方法】以自杀型质粒pSUP202 为载体, 构建包含 crtB 基 因上游2.5 kb 片段, 壮观霉素抗性基因, ubiC 、ubiA 基因和crtB 基因下游2.5 kb 片段的基 因置换质粒, 利用结合转移方法转入类球红细菌 2.4.1 中, 利用抗性机制筛选双交换突变 株, RT-PCR 方法检测引入的ubiC 和ubiA 基因转录。用HPLC 方法测定出发菌株和基因 改造菌株的辅酶Q10 产量。【结果】成功构建出基因置换质粒, 筛选出发生基因置换的突 变株, RT-PCR 证实了外源基因的转录, 并且突变株辅酶Q10 的产量比出发菌株提高40% 。 【结论】大肠杆菌的ubiC 和ubiA 基因能够利用自身启动子在类球红细菌中表达, 利用基 因改造的方法能成功提高类球红细菌的辅酶Q10 产量。 关键词: 辅酶Q10, 类球红细菌, 基因改造 基金项目：福建省发改委产业化专项项目(No. 闽财指[2010]358 号) *通讯作者：Tel: 86-591 : lili@ 收稿日期：2013-01-04; 接受日期：2013-01-30 594 微生物学通报 Microbiol. China 2013, Vol.40, No.4 Genetic manipulation of Rhodobacter sphaeroides for improved production of coenzyme Q10 * LI Li LIN Dan-Feng HUANG Jian-Zhong (1. Engineering Research Center of Industrial Microbiology , Ministry of Education , Fujian Normal University , Fuzhou , Fujian 3