HPV58型病毒E1蛋白B细胞线性表位探究.pdfVIP

指导小组成员名单 顾少华副教授 徐万祥研究员 万方数据 目 录 ㈣洲㈣咖㈣灿咖㈣I Y2705166 中文摘要 英文摘要………………………………………………………………2 第一章前言……………………………………………………………3 一、人乳头瘤病毒……………………………………………………………3 O…glIOi OI 二、B细胞抗原表位研究进展I QII glt gl…………………6 三、本课题研究目的及研究路线……………………………………………9 第二章材料和方法…………………………………………………11 OI…………OIOI 一、材料与试剂……11 O………………………………11 二、研究方法…………………………………………………………………15 第三章实验结果……………………………………………………32 一、HPV58型E1蛋白理化性质分析…………………………………………32 三、E1．N及E1．C重组蛋白的原核表达、纯化和验证………………………34 四、E1．N及E1．C重组蛋白多克隆抗体的制备及特异性检测………………39 五、HPV58 E1蛋白线性B细胞抗原表位鉴定………………………………41 第四章讨论…………………………………………………………48 参考文献………………………………………………………………s2 致谢···…····…··…···………·…········…………·········…······57 万方数据 摘要 宫颈癌是妇科肿瘤中仅次于乳腺癌的第二大杀手。1995年，国际癌症研究 具有高致癌性。进一步的研究表明，HPV持续感染是宫颈癌发生的必要起因， 危险性。HPV不同型别的检出率存在地域差异，其中，我国尤其是东南部地区 是HPV58型的高发地区之一，在某些地区的检出率甚至高于18型，仅次于16 型。 人乳头瘤病毒是一种双链环状DNA病毒，目前已鉴定出的亚型约有200种。 成，其中El蛋白在整个I-IPV家族中是保守性最强的蛋白之一。E1蛋白是病毒 DNA复制的启动蛋白，并能与E2蛋白共同作用影响宿主细胞生长周期。鉴于 HPV58型在我国的高发病率以及人乳头瘤病毒E1蛋白的高保守性和重要功能， 鉴定HPV58型E1蛋白的线性B细胞抗原表位对于研制相关疫苗和抗体药物并 最终为宫颈癌的诊断与治疗提供新的方案具有重要作用。 达、纯化，以N端和C端重组蛋白为抗原分别免疫三只雄性新西兰大白兔，获 得抗血清。随后，我们采用了改良的生物合成肽法，使用pXXGST-1短肽表达载 体合成了70条覆盖E1蛋白N端和C端的相互重叠9个氨基酸残基的18肽，利 SFNDDIFDLSEMI，EFNNPFPFDANGNPVYKI)。 本研究为后续HPV58型E1蛋白精细线性B细胞抗原表位作图奠定了基础， 对于研制相关疫苗和抗体药物并最终为宫颈癌的诊断与治疗提供新的方案具有 重要作用。 关键词：宫颈癌，HPV58型，E1蛋白，生物合成肽法，线性B细胞抗原表位 中图分类号：Q75 万方数据 Abstract issecondmostcommon cancerafterbreast Cervicalcancer