GPER激动剂G-1以不依赖GPER的方式抑制卵巢癌及乳腺癌细胞的增殖.pdfVIP

分类号 Q26 密级 学校代码 10542 学号 201002141552 抑制卵巢癌和乳腺癌细胞的增殖 The putativeG-proteincoupledestrogen G--1 receptoragonistsuppresses of ovarianandbreastcancer proliferation cellsina manner GPER—independent 研 究 生 姓名 吕向民 指导教师姓名、职称 奎互猩塾撞!至邀窒丝 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一三年四月 摘 要 G蛋白偶联雌激素受体(G 1， protein-coupledestrogenreceptor GPER)是最近新发现的一种膜相关的雌激素受体。它的作用方式和效 果与传统的核受体雌激素受体ERa和ERl3均不相同，是一种可以独 立介导雌激素作用的新型雌激素受体。GPER在多种组织包括肿瘤中 均有表达，在不同的生理／病理条件下扮演着十分重要的角色。G．1一 直被认为是GPER的选择性激动剂，用以区别GPER介导的雌激素作 用和传统雌激素受体ER介导的雌激素作用。然而，G．1结合与活化 GPER作用的机制仍然不清楚，目前关于GPER介导G．1影响癌细胞 生长的研究存在很大的争论，一些研究小组证明G．1通过激活GPER 进而促进癌细胞的生长，而另一些研究却恰恰相反，证实G．1能够抑 制癌细胞的增殖与迁移。 为阐明G．1对卵巢颗粒细胞癌增殖的作用及作用机制，本研究利 干扰(IⅢAi)技术降低目的基因表达，蛋白印迹技术检测目的蛋白的 表达量，细胞计数法检测细胞增殖，MTT法检测细胞活性，Caspase3／7 试剂盒检测细胞凋亡蛋白，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。 1．用GPER的选择性激动剂G．1处理KGN细胞后，发现G一1抑制 KGN细胞的增殖，并诱导细胞凋亡，可我们发现当敲落KGN细胞中 GPER的表达后，细胞生长变慢，表明GPER具有刺激KGN细胞生长 的作用。显然，GPER促进细胞增殖与GPER的激动剂G．1抑制细胞 增殖相矛盾。因此，我们假设G．1可能通过某种不依赖GP重麟方式 抑制KGN细胞的增殖； 后，用G．1再处理这种敲落GPER的KGN细胞，结果显示，G．1仍然 胞增殖； 3．为了进一步验证假设，我们利用GPER的选择性拮抗剂G15(最 近被发现的一种不与传统核型雌激素相互作用却能够特异结合GPER 但不激活GPER的拮抗剂)预处理KGN细胞，然后再用G．1处理细胞， 或者部分阻止G．1对KGN细胞增殖的抑制作用。但是实验的结果表 明，G15的存在并不能阻止G．1对KGN细胞增殖的抑制，说明G．1抑 制细胞增殖并不是通过激活GPER而实现的； 4．更进一步的验证与推广假设，我们使用G．1处理了另外两种无 GPER表达的细胞系：人类胚胎肾细胞HEK．293以及乳腺癌细胞 MDA．MB．231，结果显示，G．1可抑制这两种细胞系增殖，并诱导细 胞凋亡，再次表明G。1以某种不依赖GPER的机制抑制细胞增殖。 、综上所述，本研究表明GPER调节KGN细胞的增殖，但GPER 激动剂G．1以一种不依赖GPER的方式抑制卵巢癌细胞和乳腺癌细胞 的生长，并诱导细胞凋亡，其具体机制尚不清楚。由于其对肿瘤细胞 增殖有显著的抑制效果，G一1很有可能发展成为一种新型的卵巢癌和乳 腺癌治疗药物，在癌症治疗领域具有广阔的应用前景。 关键词：G蛋白偶联雌激素受体，G．1，卵巢癌，乳腺癌，雌激素 受体