高通量miRNA活性谱检测发现BHK21细胞中.PDFVIP

1016 田文洪 等/高通量 miRNA 活性谱检测发现BHK21 细胞中 miR-206 高活性 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology July 25, 2013, 29(7): 1016−1026 /cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 高通量miRNA 活性谱检测发现BHK21 细胞中 miR-206 高活性 1,2* 2* 3 2 1 2 2 田文洪 ，董小岩 ，王刚 ，郑刚 ，周庆璋 ，董哲岳 ，吴小兵 1 吉林大学生命科学学院，吉林 长春 130012 2 北京五加和分子医学研究所有限公司，北京 101111 3 中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所，北京 100052 田文洪, 董小岩, 王刚, 等. 高通量miRNA 活性谱检测发现BHK21 细胞中miR-206 高活性. 生物工程学报, 2013, 29(7): 1016−1026. Tian WH, Dong XY, Wang G, et al. High activity level of miR-206 discovered in BHK21 cells by high-throughput miRNA activity profiling. Chin J Biotech, 2013, 29(7): 1016−1026. 摘 要: 用我们建立的活细胞miRNA 活性谱检测技术测定BHK21 、HEK293 和Vero 三种肾来源细胞系中58 种miRNA 活性谱，发现miR-206 在BHK21 细胞中具有特征性高活性。鉴于miR-206 是典型的横纹肌特征性 miRNA ，进一步以小鼠成肌细胞C2C12 及人胚肾细胞 HEK293 为对照，检测了BHK21 细胞中miR-206 的活 性及表达水平。之后，用马血清诱导培养BHK21 细胞，检测诱导前后BHK21 细胞中骨骼肌肌球蛋白重链 (Slow skeletal myosin heavy chain ，MHC) 表达情况，miR-206 活性和表达水平以及受 miR-206 负调控的 Connexin43(Cx43) 的表达水平。结果发现，miR-206 在BHK21 细胞中活性和表达水平都明显高于C2C12 细胞； 马血清诱导后，BHK21 细胞中MHC 表达水平升高，miR-206 活性和表达水平都升高，而Cx43 表达水平下降。 结果提示BHK21 细胞具有成肌细胞特性。本研究首次发现BHK21 细胞中miR-206 的高活性，从miRNA 角度 证实了 BHK21 细胞来源于肾间质细胞，而不是肾实质细胞。研究结果还提示BHK21 细胞有可能作为一种体 外模型用于miR-206 的功能研究。 关键词: miR-206 ，BHK21 细胞，miRNA 活性 Received: November 14, 2012; Accepted: March 25, 2013 Supported by: National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2012AA020810), Key Technologies Research and D