鸭疫里默氏杆菌Mtan对底物SAH的催化活性.PDFVIP

微生物学通报 May 20, 2017, 44(5): 1165−1170 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160537 研究报告 鸭疫里默氏杆菌Mtan 对底物SAH 的催化活性 1 1,2 1 1 1 1 1 1,2 吴小卡 徐达 荆雅玮 吕小龙 胡剑刚 米荣升 黄燕 王成明 1* 1* 陈兆国 韩先干 (1. 200241) (2. 225009) 摘 要：【目的】分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer ，RA)不同血清型pfs 基因的序列差 异，并开展其编码蛋白S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Mtan ，又称Pfs)的催化活性研究。【方法】PCR 扩增9 株不同血清型RA 的pfs 基因，分析其核苷酸序列的同源性；构建该基因的重组表达载体 pCold-RA-pfs ，表达、纯化RA 的重组蛋白Mtan(RA-Mtan)；测定RA-Mtan 对底物S-腺苷同型半 胱氨酸(S-adenosylhomocysteine ，SAH)的催化活性，运用哈维弧菌报告菌株BB170 检测催化底物 的自诱导物2 (Autoinducer-2 ，AI-2)活性。【结果】对RA 的pfs 序列分析结果表明，不同血清型 RA 的核苷酸一致性在93.9%−100%之间；SDS检测结果表明，RA-Mtan 呈可溶性表达； 酶活测定表明RA-Mtan 和禽致病性大肠杆菌(Avain pathogenic Escherichia coli ，APEC) 的LuxS 蛋白共同作用于底物时，可产生浓度为176.7 μmol/L 的同型半胱氨酸(Homocysteine ，HCY)；AI-2 活性检测结果表明，产生的AI-2 具有生物学活性。【结论】 RA 不同血清型的pfs 高度保守，RA pfs 基因的编码产物RA-Mtan 在体外具有催化SAH 的活性，RA-Mtan 和禽致病性大肠杆菌的LuxS 蛋白共同作用于底物 SAH 时，能产生有活性的AI-2 ，为进一步研究pfs 对RA 的调控作用提供 参考。 关键词：鸭疫里默氏杆菌，S-腺苷高半胱氨酸核苷酶，S-腺苷同型半胱氨酸，密度感应系统，自 诱导物质AI-2 Foundation item: National Natural Science Foundation of China (No.; Shanghai Agriculture Applied Technology Development Program (No. *Corresponding authors: CHEN Zhao-Guo: Tel: 86-21 E-mail: zhaoguochen@ HAN Xian-Gan: Tel: 86-21 E-mail: hanxgan@163.com Received: July 25, 2016; Accepted: November 09, 2016; Published online () : December 19, 2016 基金项目(No. 3157254631370045) (No. *通讯作者：Tel 86-21E-mail zhaoguoc