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大豆脂肪酸含量的测定以及色谱分析毕业论文 目 录 摘要 I Abstract II 引言 1 1 材料与方法 1 1.1 实验材料 2 1.1.1 植物材料 2 1.1.2 主要仪器 2 1.1.3 主要试剂 3 1.2 实验方法 3 1.2.1甲酯化试剂准备 3 1.2.1样品的前期处理……………………………………………………………………...3 1.2.2脂肪提取及甲酯化 3 1.2.3 GC分析条件……………………………………………………………...………….3 2 结果与分析 5 2.1提取的时间 5 2.2甲酯化的试剂与时间 5 2.3改进的方法与传统方法比较 5 2.4精密度比较 6 3 讨论 6 致谢 8 参考文献 9 图版说明 15 生物 指导教师 摘要：m）进行气相色谱分析，通过控制甲酯化的时间，以及甲酯化的试剂，实现对不同大豆品种脂肪酸含量的测定以及对传统试验方法的改进。结果显示：采用提取液（苯：石油醚=1：1）过夜提取，0.5mol·L甲醇钠酯化处理30min，经气象色谱分析，软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸的出峰时间依次为6.35、7.84、8.73、8.86、9.06min。同时进行的正己烷提取液的对比试验，通过比较峰值，得出采用苯：石油醚=1：1提取液的方法较为精确，且此种处理方法具有快速、方便、节省药品等诸多优点；与传统的索氏提取法相比，此方法更加准确可靠。 关键词：大豆；脂肪酸；气相色谱 Fast Analysis on Fatty Acids content of Soybean Seed by Gas Chromatography Student majoring in Biological Science Yi xian-Li Tutor Chun mei-Cai Abstract：Key words: Glycine max ; fatty acid ; gas chromagraphy 引言 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 植物材料 1.1.2 主要仪器 1.1.3 主要试剂( Palmitic acid 分析纯＞ 98.5%) 、硬脂酸( Stearic acid 分析纯＞99%) 、油酸( Oleic acid 分析纯＞ 99%) 、亚油酸 ( Linoleic acid 分析纯＞ 98.5%)、 亚麻酸( Linolenicacid 分析纯＞ 99%) ，购于美国SIGMA 公司； 正己烷( 色谱纯＞ 99.9%) ；甲醇( 分析纯＞ 99%) 、苯（分析纯＞99%）、石油醚( 分析纯＞99%)、氢氧化钠（分析＞99%）。分别采用正己烷和苯：石油醚=1：1对5 种脂肪酸标准样品进行稀释至0.05mol/L。 1.2 实验方法 1.2.1.2.2样品前期处理 将样品用万能粉碎机粉碎后，称取0.35g豆粉样品于1.5ml的离心管中，加入1ml正己烷，充分振荡0.5min，室温放置5h。 1.2.3脂肪提取及甲酯化 检测方法将供试材料用研磨仪充分研磨磨好后取 0.04 g 的豆粉放入 2.0 mL 离心管中加1 mL脂肪提取液振荡混匀10 min离心后取上清加 1 mL0.5 mol/L 甲醇钠甲酯化静置 10 min加饱和 NaCl 溶液至样品分层。吸取 1 μL 上清液进入气相色谱。 .2.4 色谱条件 为了获得较好的分离效果、较高的灵敏度和理想的分辨率，分析前对不同的进样口压力、载气流速、程序升温条件等实验条件进行了优化。最终确定了以下色谱条件。 色谱分析条件：美国安捷伦公司 Agilent6890N 气相色谱仪，FFAP 弹性石英毛细柱（30m×320μm×0.25μm），进样口为 Agilent 分流/不分流进样口，进样口温度为 250℃，FID 检测器温度为 250℃，氮气流速 40ml/min，氢气流速 40ml/min，空气流速 450ml/min，分流比 20:1，样品进样量 1μl，程序升温：初始温度 80℃，25℃/min 到 200℃，再以 3℃/min 到 215℃，最后以 2℃/min到 230℃。 不同萃取溶剂对脂肪酸提取效果比较 图1 苯和石油醚做萃取剂提取大豆脂肪酸的气相色谱分析谱图 图2 正己烷做萃取剂提取大豆脂肪酸的气相色谱分析谱图 结果显示，由苯、石油醚以及正己烷做溶剂提取脂肪酸，二者提取结果相差不大，苯和石油醚的混合物效果略好。所以本实验对50个样品进行脂肪酸提取采用的是苯和石油醚作为脂肪酸的提取溶剂。 2.2 不同对脂肪酸提取效果比较 图4 甲酯化时间提取大豆脂肪酸的气相色谱分析谱图