维生素A测定课件.ppt

维生素的测定;第一节 概 述; 在评价食品的营养价值，开发利用高含量维生素的食品资源，指导人们合理调整膳食结构，指导制定加工工艺或贮存条件，最大限量地保留各种维生素，还要控制强化食品中加入量，防中毒，都离不开分析检测工作。 ;维生素分类：脂溶性（A、D、E、K） 水溶性两类（B族、C） ;第二节 脂溶性维生素的测定; 3、耐热、耐氧化性 耐热性 氧化性 VA 好，能经受煮沸 易被氧化 （光、热促进其氧化） VD 好，能经受煮沸 不易被氧化 V E 好，能经受煮沸 在空气中能慢慢被氧化 （光、热、碱促进其氧化） ; 根据上述性质．测定脂溶性维生素时，通常： 皂化样品 水洗去除类脂物 有机溶剂提取脂溶性维生素(不皂化物) 浓缩 溶于适当的溶剂 测定。 在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂(如焦性没食子酸、维生素C等)。 ;一、维生素A的测定;寅伤魔歪吁鼠浦外捆碟靡苟俊荆煤音廊沾钙锤砖导坏表摘都筒抢唐残蒜岗维生素A测定课件维生素A测定课件;GB/T 5009.82—2003中第一法 高效液相色谱法测定维生素A是近几年发展起来的方法，此法能快速分离、同时测定维生素A和维生素E 最小检出量分别为VA：0.8ng；α-E：91.8ng；γ-E：36.6ng；δ-E：20.6ng。;;分析步骤 皂化→提取→洗涤→萃取→浓缩→ 溶解→离心→测定→结果计算 ;; 2）提取 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50mL水分2－3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用约100mL乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣，乙醚液并入分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤入分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。 ;; 4）浓缩 将乙醚提取液经过无水硫酸钠（约5g）滤入与球形蒸发瓶内，用约10mL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于55°C水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中剩下约2mL乙醚时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚。加入2.00mL乙醇，充分混合，溶解提取物。将乙醇液移入一小塑料离心管中，离心5min（5000rpm)。上清液供色谱分析。 ; 标准曲线的制备 将维生素A和维生素E标准品配置成标准溶液（约1mg/mL），制备标准曲线前用紫外分光光度法标定其准确浓度。标准浓度的标定方法 取维生素A和维生素E标准液若干微升，分别稀释至10.00mL乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算该维生素的浓度。 ;测定条件;标准浓度计算： X1 = A/E×1/100×10.00/(S×10-3) 式中：X1——维生素A浓度，g/mL； A ——维生素A的平均紫外吸收值； S ——加入标准的量，μL； E ——维生素A 1%比吸光值； 10.00/(S×10-3)——标准液稀释倍数 ;2）绘制标准曲线 标准和内标物进行色谱分析，以维生素A峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标，维生素A浓度为横坐标绘制标准曲线。;高效液相色谱分析 预柱: ultrasphere ODS 10μm, 4mm×4.5cm 分析柱:ultrasphere ODS 5μm, 4.6mm×25cm 流动相:甲醇:水＝98:2 混匀,于临用前脱气 紫外检测器波长：300nm 进样量：20μL 流速：1.7mL/min;注意事项;二、比色法测定VA的含量 GB/T 5009.82—2003中第二法原理 在氯仿溶液中，VA与三氯化锑可生成蓝色可溶性络合物，在 620 nm 波长处有最大吸收峰，其吸光度与VA的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。;三、β—胡萝卜素的测定; 胡萝卜素原只存在于植物性食品中，但以胡萝卜为食物的家禽、兽类、水产动物及其加工产品，以及为着色而添加胡萝卜素的食品也含有胡萝卜素。; 胡萝卜素对热及酸、碱比较稳定，但紫外线和空气中的氧可促进其氧化破坏。因系脂镕性维生素，故可用有机溶剂从食物中提取。 胡萝卜素本身是一种色素，在450 nm 波长处有最大吸收，故只要能完全分离，便可定性和定量。但在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、叶黄素等共存，在提取 β一胡萝卜素时，这些色素也能被有