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自主实验：邻二氮菲测定微量铁的条件探索 【试验目的】 掌握紫外可见分光光度计的基本操作。 掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法。 掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长的选择。 掌握标准曲线的绘制及应用。 掌握探索实验条件的基本方法步骤。 掌握各种试剂的配制和保存。 学习对一种检测方法进行评估。 【实验原理】 邻二氮菲（1,10-邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe离子形成红色配位离子： 在pH=3~9范围内，该反应迅速完成，生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1*104，反应十分灵敏，Fe2+离子浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。实验中，采用pH=4.5~5的缓冲溶液保持标准系列溶液与样品溶液的酸度，采用盐酸羟胺还原标准液及样品溶液中的Fe3+离子并防止测定过程中二价铁离子被空气氧化。 研究一个变量对实验的影响，必须先固定其他的变量，保证单一变量进行对实验最佳条件的探索。 【实验仪器与试剂】 仪器：V-1100D型可见分光光度计，分析天平pHS-3C型酸度计、 E-201-CpH复合电极一只、磁力搅拌器一台; 试剂： 邻二氮菲[邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）] 盐酸羟胺[盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制）] NaOH、冰醋酸，醋酸钠[pH=3.6醋酸盐缓冲液，pH=4.6醋酸 盐缓冲液，pH=5.6醋酸盐缓冲液] （NH4）2Fe（SO4)26H2O[标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L）] 甲醇，H2SO4。(均为分析纯) 铁样品溶液 用品：50ml容量瓶7个，100ml容量瓶1个，500ml容量瓶1个，5ml 移液管2只，10ml移液管2只，1cm玻璃比色皿2个，50ml 烧杯一个，100ml烧杯1个，250ml烧杯2个，500ml烧杯1 个，玻璃棒2根，500ml试剂瓶4个，250ml棕色试剂瓶1个， 500ml试剂瓶1个。 【实验步骤】 探索合适的缓冲溶液的pH: (1)pH=3.6、4.6、5.6的醋酸盐缓冲液的配制：将2.9026g分析纯的NaAc加入烧杯，移取2.85ml冰醋酸溶解，500ml容量瓶定容，用酸度计调节至pH=3.6、4.6、5.6，分别装入不同的试剂瓶，待用。 邻二氮菲溶液配制（0.15%，新鲜配制）:分析天平称量0.15g邻二氮菲，溶于2ml甲醇中，加热量蒸馏水，转入100ml容量瓶定容，棕色试剂瓶保存，待用。 盐酸羟胺溶液配制（10%，新鲜配制）：分析天平称取10g盐酸羟胺，和少量蒸馏水加以溶解吗，然后转入100ml容量瓶中，定容，装入试剂瓶，待用。 标准铁储备溶液配制（1.00×10-3mol/L）:分析天平准确称取0.1961g（NH4）2Fe（SO4)26H2O于100ml烧杯中，用5ml水与硫酸1:1混合的溶液中溶解，待达常温后，转入500ml的容量瓶中定容，保存于试剂瓶中，待用。 按下表分别用不同的酸度的缓冲液配制溶液，寻找最大吸收波长。 标号 1(PH与待测溶液ph相同) 2(PH=3.6) 3(PH=4.6) 4(PH=5.6) 标准铁溶液 0.00ml 3.00ml 3.00ml 3.00ml 盐酸羟胺溶液 1.00ml 1.00ml 1.00ml 1.00ml 邻二氮菲溶液 5.00ml 5.00ml 5.00ml 5.00ml 醋酸盐缓冲液 5.00ml 5.00ml 5.00ml 5.00ml 说明 以上溶液移至50ml容量瓶，蒸馏水定容至50ml 吸收曲线绘制：用1cm的比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定不同ph缓冲溶液在不同波长下的吸光度，以吸光度为纵坐标，波长为横坐标制图，绘制吸收曲线，并从吸收曲线上找出最大吸收波长。 pH=3.6时： 波长 480nm 482nm 484nm 486nm 488nm 490nm 492nm 494nm 496nm 498nm 吸光度 0.815 0.821 0.825 0.83 0.839 0.845 0.856 0.86 0.869 0.883 波长 500nm 502nm 504nm 506nm 508nm 510nm 512nm 514nm 516nm 518nm 吸光度 0.885 0.89 0.892 0.887 0.885 0.874 0.852 0.838 0.814 0.772 波长 520nm 522nm 524nm 526nm 528nm 530nm 532nm 534nm 536nm 538nm 吸光度 0.744 0.688 0.658 0.621 0.562 0.