玉米及大斑病菌构成的不同互作中基因表达的研究.pdf

分类号：QZ81 单位代码：!QQ8§ 密级：垒Ⅱ 学 玉米与大斑病菌构成的不同互作中 基因表达的研究 Interactions 学位申请人： 郝敏 指导教师： 韩建民教授 董金皋教授 学科专业： 植物学 学位类别： 理学硕士 授予单位： 河北农业大学 答辩日期： 二oo六年六月十二日 摘要 玉米大斑瘸是【{|玉米大斑病菌引起的玉米”部七要病害，培育和种植玉米抗病品 种是防治玉米大斑病最经济、有效的途径。因此，分离、克隆玉米抗大斑病相关基因， 明确其编码蛋白的身份和功能．对于揭示玉米抗大斑病的分予机制和抗病基因工程育 种具有重要意义。 本试验以玉米自交系B37册J与玉米大斑病菌O号小种和l号小种构成的非亲和 叶片的基因表达情况进行分析，回收非亲和性互作中特异表达的基因片段，对其进行 克隆、测序及同源性分析。 试验获得以下主要结果： ①采用PcR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，对26个随机引物进行筛选。结果 发现，6个引物适合一步扩增法，退火温度在40～47℃之间；9个引物适合两步扩增 法，退火温度(第二步扩增)在46～5l℃之f-自J。 胶电泳和银染检测，共获得差异表达基因片段107条。这些片段可以分为三类：A． 亲和性互作及对照中没有，非亲和性互作中特有的片段26条，占24％；B．与亲和性 互作及对照相比，非亲和性互作中表达量增加的片段39条，占36％：C．与亲和性互 作及对照相比，非亲和性互作巾表达量降低的片段42条，占40％。对它们进行回收 和二次扩增，经1．2％琼脂糖电泳检测，其一}t98个网收产物能产qi扩增条带，差异条 带的回收率为92％。 ④选出A类片段中的5条进行克隆、测序和同源性分析，结果发现它们与已知 蛋白质序列的同源性都比较低，为30％～40％，可能为新基因。对于这些片段的功能 还需进一步获得基因全长和通过功能互补实验爿‘能确定。 关键词：玉米：玉米大斑瘸：抗病棚关丛凶；DDRl二PCR：丛凶克隆 TheGene inDif．ferent Expression Com甚脚厅促盯缸m，c缸 Interactions AuthOr：HaoMin HANJian．mln(Professor) Su卵rvisO瑙： DO州G Jin噶ao(ProfesSor) Major： BOtany Abstract Nonhemcom caused oneofthe com leafblightby＆fD印厅口er面f“，cf∞1s importaIlt leaf and resistalltcom is也emoste∞nomicaland diseaseS．Breedjng growing species emcicntmethodtocomrolNorthem