肠病毒71(EV71)3C蛋白酶抑制剂的发现和功能研究.pdf

Sch001Code：10270 Number：112200900 Registration Normal ShanghaiUniversi哆 MasterThesiS ofEnteroVirus inhibitors Discovery 71(EV71)3C protease andtheirfhnctionalstudies Lif．eandEnVironmentScience of CoUege Department Major Zoology Molecular Cellularand Zoological Biology Special锣 Name PeiSi AdVisor Wan Prof．Ping Prof．XuShen ofMateria Institute Medica，Chinese (Shanghai of AcademySciences) A／Prof．LiliChen IⅡstituteofMateria (Shanghai Medica，Chinese of AcademySciences) Date April，2014 摘要 foota11dmouthdisease 手足口病(Hand HFMD)是一种由肠道病毒引起的儿 童传染病，又名发疹性水疱性口腔炎，以手、足和口腔粘膜疱疹或者破溃后形成 溃疡为主要临床症状。引起手足口病的肠道病毒有20多种，其中以柯萨奇病毒 A16型(CoX 3Cpm(Ev71 死率最高、感染力最强的肠道病毒。EV71 3C蛋白酶)基本上参与 了EV71病毒复制中所有蛋白的剪切，对EV7l病毒的复制非常重要，另外，它 还具有抑制宿主免疫系统、关闭宿主细胞蛋白合成体系、诱导宿主细胞程序性凋 亡等功能，所以EV713cp”被作为抗病毒的靶标，能够筛选到抑制Ev713Cpm 的活性的化合物对于治疗手足口病具有很重要的研究意义。 本文通过转化、挑单菌落、37度摇菌、转接、低温诱导等一系列步骤进行 EV71 3Cp∞的原核表达；通过镍柱结合原理进行该蛋白酶的纯化；通过FI汪T(荧 光共振能量转移)的原理，合成在两端加上荧光基团并且含有EV7l多聚蛋白自 为底物来建立EV713Cp”的测活平台；通过SPR(表面等离子共振)技术和虚拟 筛选的方法从7164个小分子化合物中筛选与Ev7l3C蛋白酶有结合的小分子， 然后在建立的EV71 验证所筛选到的化合物对该蛋白酶是否具有抑制