肠道病毒71H6株在Vero细胞上的传代适应.pdf

A 摘 要 肠道病毒71型(EV71)感染可引起手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎、脊 髓灰质炎样麻痹、脑十脑炎、肺水肿等多科，疾病。近年来，引起，慨煎神经系统疾病的 国大陆等。在过去的lO年罩，由EV71引起的神经系统综合症不断增多。随着EV7l在 全1廿界范围的蔓延，如何有效治疗和摔制该病毒的传播一直是人们关注的焦点。由于目 前尚无针对EV71的特效约和疫苗，因此，研发～种能有效控制EV71流行的疫苗已势 在必行。本课题研究了EV71H6株在Vero细胞中的传代适应，为以后制备疫前提供大 量抗原。 本课题以EV71H6株病毒为研究材料，建立其在Vero细胞卜的适应株。首先将EV7l H6株病毒在RD细胞上进行分离，并在Vero细胞上通过蚀斑筛选和适应性传代，然后 丌展／土物学、免疫学及理化学特性的研究。 用常规方法处理来自临床确诊为手足口病患儿的粪便标本。将标本接种于RD细胞， 肓传3代后即可出现明显的细胞病变，然后在Vero细胞上进行蚀斑筛选和连续传代培 养。结果显示，各代病毒蚀斑直径大小没有变化，传至第5代时，CPE明硅增多，病毒 滴度从4．75 LogCCIDso／ml提高到8．13 H6株病毒的最佳培养条件试验表明，制备毒科t的适宜MOI LogCCIDst，／ml以上。EV71 为0．Ol；在96小时左右收获的病毒滴度最高；在．80℃环境卜．能够稳定保存。理化学研 究试验结果表明，EV71核酸类型为RNA，不具有耐热性，但可耐受乙醚、酸的作用。 经传代后的稳定性试验研究表明，EV71H6适应株可被特异抗EV71血li青中和，证明该 病毒确为EV71型。用EV71H6适应株病毒免疫家兔，以RD细胞为肇质进行中和试验， 其免疫原性研究结果显示，中和抗体效价有了逐步提高，最高町达l：1024，显示了良 好的免疫原性。 初步试验结果表明，EV71H6株在Vero细胞中能进行适应性传代，并保持稳定的 gi物学性状。该结果为EV71疫苗的进一步研究提供了很有价值的参考数据。 关键词：肠道病毒71型，Vero细胞，适应性，病毒滴度 has Enterovirus7 beenassociatedwith 1(EV71)infection hand—foot．and．mouth disease(HFMD)， herpangina，asepticmeningitis，polio—likeparalysis，brain-stem edema．Several encephalitis，pulmonary EV71 outbreaksassociatedwithsevere diseaseswere inAsia—Pacific neurological recentlyreported region， in1 in1 in in1 997 997，Australia and in1 includingMalaysia 999，Singapore2000，Japan 2000，Taiwan998， andChinain2008and2009．ThecaseswithEV71一associated syndrome increased neurologicalcontinually in countries ten the ofEV71 inthe arefocusonhowto many duringpast years．Wi