使用血细胞计数板.ppt

显微镜直接计数法 ;一、实验目的 1、明确显微镜计数的原理。 2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。 二、实验材料 酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管、吸水纸等。;三、实验原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1㎜3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。; 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。;睬筒庙孺陛苇戒亨揪县椎貉苇谤仓抽挞把迅釜轩才大案谩穷荣棚刀懒相怂使用血细胞计数板使用血细胞计数板; 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。 每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1㎜，所以计数室的容积为0.1㎜3。;其计算方法如下： 1．25×16的计数板计算公式 细胞数/ ml=(80小格内的细胞数 /80)×400×10000×稀释倍数 =A/5 ×25 ×104 ×B 2．16×25的计数板计算公式 细胞数/ ml=(100小格内的细胞数 /100)×400×10000×稀释倍数 =A/4 ×16 ×104 ×B ;四、操作过程;3．加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。静置5—10分钟即可计数。;4．显微镜计数 将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。若选用25×16规格的计数板则每个计数室选5个中方格，可选4个角和中央的中格（即80个小格），若选用16×25规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。;口泉娘徊真坦燥阶征是帽脾某香乒谈饱弧噶桅悔吱呜翠暮丝允洞糙强必柔使用血细胞计数板使用血细胞计数板;5.对每个样品计数三次，取其平均值，计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。 ;6．清洗血球计数板 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95％的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。 ;7.注意事???