重组胰岛素原在毕赤酵母中高效分泌表达的研究.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 6 :226-230 重组胰岛素原在毕赤酵母中高效分泌表达的研究 梁果义  甘一迪  刘晓航  蔡祥胜1 1 1 2 （1. 北京双鹭药业股份有限公司，北京  100043；2. 南方医科大学生物治疗研究所，广州  510515） 摘 要 ： 为了提高胰岛素在酵母的分泌表达效率，首先合成了胰岛素原基因，并在其序列的N端引入了一段引导肽，构建 成pPICZα-A-Pro-INS重组分泌型表达载体。将表达载体线性化处理后电击转化毕赤酵母GSll5感受态细胞，筛选获得分泌型高表 达工程菌株，重组蛋白的表达水平为300 mg/L，占分泌总蛋白的40％左右。该结果表达明引导肽的存在对于在毕赤酵母中高效表 达胰岛素的基因至关重要。 关键词 ： 胰岛素 ；毕赤酵母 ；高效表达；引导肽 DOI：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.06.033 Study on the Highly Secreted Expression of the Recombinant Insulin in Pichia pastoris LIANG Guo-yi  GAN Yi-di  LIU Xiao-hang  CAI Xiang-sheng1 1 1 2 （1. Beijing SL Pharmaceutical Co. ，Ltd. ，，Beijing 100043 ；2. Institute of Biotherapy of Southern Medical University ，Guangzhou 510515 ） Abstract:  In order to improve the efficiency of insulin secretion expression in yeast，firstly the pro-insulin gene was synthesized，and a  recombinant secreted expression vector（pPICZα-A-Pro-INS）was constructed by inserting a leader peptide to N-end of the gene’s sequence.  Linearized expression vector was transformed into the competent cells of Pichia pastoris GSll5. A strain with highly secreted expression of the  insulin was screened，by which the secreted recombinant protein expression level was 300 mg/L，accounting for about 40% of the total secreted  protein. This result revealed that the leader peptide is crucial to the gene of highly expressing insulin in P. pastoris.  :  insulin； ；highly expression；leader peptide Key words Pichia pastoris 糖尿病是一种全身性慢性疾病，病因复杂，并 例如，可对表达的蛋白进行翻译后加工与修饰、具 发症多，治愈率低，成为国际医学的一大难题，被 有强的可控的醇氧化酶基因强启动子、表达载体是 世界卫生组织称为不死的癌症。