安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因真核表达载体的构建.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuingri．Sci．2012，40(7)：3860—3862 责任编辑 朱琼琼 责任校对 李岩 安 氏隐孢子虫肌动蛋 白部分编码基因真核表达载体 的构建 陈健 ，胡进平 ，宫鹏涛 ，李建华 ，杨举 ，李赫 ，张国才 ，张西臣，任文陟 (1．吉林大学实验动物 中心 ，吉林长春 130062；2．吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春 130062) 摘要 [目的]将安氏隐孢子虫肌动蛋白基因进行克隆并在Hela细胞 中真核表达。[方法]根据筛选安 氏隐孢子虫r丌噬茵体展示文库 获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因序列设计特异性引物，扩增目的基 因CA42，构建重组真核表达载体 pVAX1-CA42，将其转化入 He— la细胞，用间接免疫荧光、SDS—PAGE、Westernblotting检测CA42蛋白在转染细胞 中的表达情况。[结果]重组质粒能在 Hela细胞 中表 达，且表达产物具有反应原性。[结论]成功克隆并表达了安氏隐孢子虫肌动蛋白基因，并在Hela细胞 中能够稳定表达。 关键词 安氏隐孢子虫；肌动蛋 白；真核表达 中图分类号 S852．72 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2012)07—03860—03 Construction ofEukaryoticExpressionVectorwithPartialEncodingSequenceofAetinfrom Cryptosporidium andersoni CHENJianetal (LaboratoryAnima1Center，JilinUniversity，Changchun，Jilin130062) Abstract [Objective]ToclonetheactingeneofCryptosporidiumandersoni，andtostudyitseukaryoticexpressioninHelaceils．[Method] Specificprimersweredesignedforthepartialencodingsequenceofactin，whichwereobtainedbyscreeningtheT7phagedisplaylibrary of Cryptosporidium andersoni，andtheactingeneCA42wasamplifiedbyPCR．RecombinanteukaryoticexpressionplasmidpVAX1一CA42was constructedandtransfectedtoHelacellswithlipofectionstrategy．Indirectimmunofluorescencestaining，SDS—PAGE andWesternblottinga— nalysiswereusedtodetecttheexpressionofrecombinantproteininHelacells． 『Result]CA42proteinwasSuccessfuflyexpressedinHela cells，andtheexpressionproductshadreactogenicity．[Conclusion]ThepartialencodingsequenceofactinfromCryptosporidiumandersonihas beensuccessfullycloned，and itcanbestablyexpressedinHelaCells． Keywords Cryptosporidium andersoni；Actin；Eukaryoticexpression 隐孢子虫是一类寄生于人类和脊椎动物 胃肠黏膜上皮 1．1．2 质粒和菌株。安氏隐孢子虫 17噬菌体展示文库 由 细胞的重要原虫 。由它引起的在临床上表现为严重水样 实验室构建，大肠杆菌JM109、pVAX1载体菌液、Hela细胞由 腹泻症状的疾病称为隐孢子虫病 。安 氏隐孢子虫可感染断 实验室保存；鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清由实验室制备。 奶犊牛、育成牛和成年牛 ，引起 胃炎 ，且感染时间长，并伴 1．1．3 主要试剂。质粒提取试剂盒为天根公 司产 品； 随着产奶量下降、体重减轻等症状，且具有较高的发病率 ， pMD18一T