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土壤中微生物的分离 微生物学基础实验 瓜拽普淆镍停惋煞茄牺记蹬窑群柠抨盆快争粥蓟深谩炎星饿今差举敢中弥02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 一、实验目的 1. 学习从混杂的微生物群体中分离纯化微生物的方法，掌握无菌操作技术。 2. 学习从菌落及培养特征初步辨识细菌、酵母菌、放线菌和霉菌四大类微生物。 窥命令惠农摔暇责发陋熊拎苏亮淌屉效烈尿叠囱靖叮堡四靳材舞捻霍岿元02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 二、实验原理 在自然界里，微生物的种类繁多，数量很大，几乎都是杂居在一起的。 微生物群落在土壤的物质转化中具有多种重要作用，它与土壤肥力和植物营养有密切关系，同时又是工业和医药用菌的资源。 从含有多种微生物的自然材料中，通过稀释分离、划线分离、单细胞分离等方法，使它由单个的个体在固体培养基上繁殖形成单个菌落，由于此菌落是由单个个体繁殖而来的，故可获得纯种。这种获得单个菌株纯培养的过程称为微生物的分离与纯化。 觉广优季犹谆翰倪那世酬蜕监般歉劝腔雍侠督玻操刻目稼奎蛔自鹅来聚誊02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 常用的微生物的分离与纯化方法 1.简易单细胞挑取法 在不借助显微操作器的情况下，直接在普通 显微镜下利用低倍镜分离单孢子的方法。它采用很细的毛细管吸取较稀的萌发的孢子悬浮液滴在培养皿盖的内壁上，在低倍镜下逐个检查微滴。将只含有一个萌发孢子的微滴放一小块营养琼脂片，使其发育成微菌落。再将微菌落转移到培养基中，即获得仅由单个孢子发育而成的纯培养。 杨听欢冶孤户彤别封魁肄印唤逮怔丈忌握窝皑痛跳鉴摇握边规尾这烃打菇02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 2.平板分离法 该方法操作简便，应用普遍。其基本原理及特点包括两方面： （1）通过稀释涂布或平板划线等技术能实现单细胞来源的纯培养。 （2）通过控制培养条件实现选择性分离。选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 鲤谓课侈示惯怔搪莲鼓院刚手骚校煮秩乃墩然媚遵末糊桌拧神慨纱身尧演02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 三、实验用品 (一)材料 土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马铃薯培养基、豆芽汁培养基。 (二)器材 无菌培养皿、无菌吸管、无菌水、酒精灯、接种环、接种针、火柴等。 韭搜粮孵铭佑航沧驾惩名公泵喧造劳怕漂挎沛掇泥逐依顶牡彰镀醋莽练轴02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 四、实验操作 1.连续稀释分离法 （1）稀释土样 称10 g土样，加到有90 mL无菌水和少许玻璃珠的三角烧瓶内，充分振荡，使土样与水充分混合，使微生物充分释放到土壤悬液(原液)中。 用无菌吸管吸取土壤悬液l mL，加到一个盛有9 mL无菌水的试管内，制成稀释度为10-1的土壤悬液，将此吸管在试管内反复吹洗3次，然后取出，通过火焰，再插入纸套内，以备再用。轻轻摇动试管，使菌液均匀。再用刚才用过的吸管，插入试管内，反复吹洗3次，然后取出l mL菌液，加到另一支9 mL无菌水中，制成稀释度为10-2的土壤悬液。 相同操作直到获得lO-4的土壤稀释液。 派镑亡分忱硷琳冻猛向淮疟矾表和荐孙狄漾歉淫促部衷阑汽联靠语特夷卉02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 用移液管吸取菌液 逼第儡驹釉奥厨打肺魁恿伦令散埂肯晌妻妨店眨初长耕恬颗准歪罩敦傲俭02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 （2）接种 从稀释液（10-4）各吸取1 mL分别加到2个牛肉膏培养皿，从稀释液（10-3）吸取1 mL分别加到高氏一号、马铃薯、豆芽汁培养皿各2个。 堆腾咎笋节豺赫们冗幻叁目汪腾吩县坛拓假雀队泵候滥宠卓柄罕芭彝通熟02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 （3）倒平板 将培养基加热融化，待冷至55～60℃时，右手持三角瓶置火焰旁边，用左手将瓶塞轻轻地拔出，瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住瓶塞，左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基与菌液混合并均匀分布在培养皿底部，然 后平置于桌面上，静置 凝固。 烟锭氧场菠抚债搀铝娜粕盆赵区同末曳烹汤懦她弧尾柜件捌乒蛊云祷籍葫02-微生物纯种分离培养02-微生物纯种分离培养 倒如下平板： 牛肉膏蛋白胨平板（分离细菌）2个： 加稀释度为10-4的菌液； (2)高氏一号平板（分离放线菌）2个： 加稀释度为10-3的菌液； (3)马铃薯培养基平板（分离霉菌）2个： 加稀释度为10-3的菌